右美托咪啶鞘內(nèi)注射對大鼠急性疼痛行為及脊髓背角GIRK2表達的影響.pdf

1、疼痛是一種不愉快的主觀感受,通常被各種物理及化學(xué)性因素等傷害性刺激所誘發(fā),在組織細胞損傷或炎癥狀態(tài)下,相關(guān)細胞因子及活性物質(zhì)釋放增多,通過外周感受器的傷害性傳入而激發(fā)疼痛反應(yīng)。傷害性信息通過初級傳入傷害性感受器換能后,傳遞到背根神經(jīng)節(jié),再由Aδ和C纖維傳入脊髓背角神經(jīng)元,在脊髓背角神經(jīng)元初步整合后,經(jīng)過上行通路進入大腦高級疼痛中樞,經(jīng)中樞整合產(chǎn)生痛覺與疼痛反應(yīng)。同時,通過腦干下行抑制系統(tǒng)經(jīng)脊髓背外側(cè)束下行對延髓和脊髓背角痛覺感受性信息的

2、傳入產(chǎn)生抑制性調(diào)節(jié)。
　　創(chuàng)傷后疼痛刺激作用于傷害性感受性受體,激活離子通道,增強傷害感受器敏感性和興奮性,產(chǎn)生疼痛的外周敏化及中樞敏化,其機制復(fù)雜且至今尚未明晰。在細胞損傷或炎癥狀態(tài)下,細胞因子通過相應(yīng)的離子通道、受體作用于外周傷害性感受器,使傷害性感受器興奮性及敏感性發(fā)生改變而產(chǎn)生外周痛覺敏化。而在外周敏化及持續(xù)傷害性刺激下,通過激活更多的細胞因子及基因表達等多種機制導(dǎo)致脊髓背角和大腦高級中樞產(chǎn)生中樞敏化。
　　目前認為

3、,傷害性刺激導(dǎo)致急性疼痛的機制與鉀離子通道相關(guān),其保護性反射的形成與G蛋白耦聯(lián)內(nèi)向整流性鉀通道(Gprotein-coupledinwardlyrectifyingpotassiumchannel,GIRK)蛋白相關(guān)。眾多資料表明,GIRK通道在調(diào)節(jié)靜息電位、調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性和神經(jīng)遞質(zhì)釋放中起重要作用,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中可與多種受體相耦聯(lián),使細胞膜超級化,抑制神經(jīng)元沖動的發(fā)放,從而減弱疼痛信號的傳導(dǎo)。深入研究GIRK通道與疼痛的關(guān)系,將有

4、助于揭示疼痛發(fā)生與發(fā)展的一些機制。在痛覺傳遞的上行傳導(dǎo)系統(tǒng)和下行抑制系統(tǒng)各重要位點都存在GIRK通道的表達,并可通過多種受體來激活GIRK通道,足可證明GIRK通道在疼痛信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。右美托咪啶作為一種高選擇性的α2-腎上腺素能受體激動劑,已證實其具有鎮(zhèn)痛作用,但是其對于急性創(chuàng)傷性疼痛形成及持續(xù)過程中脊髓背角GIRK2的表達及作用如何,以及在持續(xù)性的疼痛刺激對GIRK2mRNA表達的影響如何,目前知之甚少。
　　故此,本研

5、究擬建立大鼠切口痛模型,通過預(yù)先鞘內(nèi)注射α2-腎上腺素能受體激動劑右美托咪啶(Dexmedetomidine,DEX),觀察其對切口痛大鼠術(shù)后疼痛行為、脊髓背角GIRK2蛋白表達及對GIRK2mRNA表達的影響,評價右美托咪啶鞘內(nèi)注射對減輕大鼠術(shù)后痛覺過敏形成的作用,并探討其可能鎮(zhèn)痛機制,為臨床研究及應(yīng)用提供理論參考。
　　方法：
　　8-10周健康成年雄性SD大鼠90只,體重230-330g,清潔級。將大鼠隨機分為對照組(

6、I組,不作任何處理)、手術(shù)組(S組,行左足切開手術(shù))、安慰劑組(P組,先鞘內(nèi)注射生理鹽水后行左足切開手術(shù))、實驗1組(LD組,先鞘內(nèi)注射DEX0.75ug/kg后行左足切開手術(shù))、實驗2組(HD組,先鞘內(nèi)注射DEX1.5ug/kg后行左足切開手術(shù)),每組18只。使用vonFrey細絲法測定各組大鼠術(shù)后20min、30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、8h、d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7等不同時間點大鼠機械痛閾的改變。

7、采用免疫熒光技術(shù)檢測各組大鼠術(shù)后2h、4h脊髓背角GIRK2蛋白表達的變化,ReverseTranscriptionquantitativereal-timePCR(RT-qPCR)技術(shù)檢測脊髓背角GIRK2mRNA的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.機械痛閾的變化對照組在各觀察時間點的機械痛閾差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)前各組機械痛閾差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。S組術(shù)后20min、30min、1h、2h、3h、

8、4h、5h、6h、8h、d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7等觀察時間點的機械痛閾較術(shù)前均明顯下降,提示大鼠切口痛模型成功。與I組比較,S組、P組術(shù)后20min、30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、8h處于明顯低值(P<0.01),術(shù)后d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7的機械痛閾逐步回升,但仍未恢復(fù)術(shù)前水平(P<0.05);LD組和HD組術(shù)后各觀察時間點的機械痛閾也明顯下降(P<0.05),但下降幅度明顯低于S組與

9、P組(P<0.05),LD組與HD組在術(shù)后20min、30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、8h、d1、d2、d3、d4、d5、d6等觀察時間點的機械痛閾值下降幅度接近(P>0.05),且至術(shù)后第7天基本恢復(fù)術(shù)前水平。術(shù)后機械痛閾值LD組與HD組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.脊髓背角GIRK2蛋白的表達建模后2h、4h,I組、S組、P組的GIRK2陽性細胞數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與S

10、組、P組比較,LD組和HD組的GIRK2蛋白表達陽性細胞數(shù)均明顯增加(P<0.01),但LD組與HD組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.與I組比較,術(shù)后2h、4hS組、P組、LD組及HD組的GIRK2-mRNA表達水平均升高(P<0.05),但LD組和HD組表達水平升高幅度低于S組、P組(P<0.05);S組與P組、LD組與HD組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后2h與4h比較,各組GIRK2mRNA表達

11、水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.右美托咪啶預(yù)先鞘內(nèi)注射能提高切口痛模型大鼠的機械痛閾值,減輕大鼠急性創(chuàng)傷后的疼痛反應(yīng)。
　　2.右美托咪啶預(yù)先鞘內(nèi)注射能增加大鼠脊髓背角GIRK2蛋白的表達水平,提示其鎮(zhèn)痛作用可能與通過上調(diào)GIRK2蛋白表達有關(guān)。
　　3.右美托咪啶預(yù)先鞘內(nèi)注射能降低切口痛大鼠脊髓背角GIRK2mRNA的表達水平,提示其可能通過抑制疼痛相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活化而抑制疼痛脊髓水