轉(zhuǎn)錄因子RFX1調(diào)控狼瘡T細(xì)胞CD11a和CD70基因表達(dá)的表觀遺傳機(jī)制研究.pdf

1、目的：大量研究證實(shí)表觀遺傳調(diào)控異常在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)發(fā)病中發(fā)揮重要作用。SLE患者CD4+T細(xì)胞中自身免疫相關(guān)基因CD11a和CD70表達(dá)水平異常升高與其啟動(dòng)子區(qū)DNA低甲基化和組蛋白H3高乙酰化密切相關(guān)。我們前期研究已經(jīng)證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子RFX1(Regulatory factor X-box1，RFX1)可升高CD11a和CD70基因的啟動(dòng)子甲基化水平，降低組蛋白H3乙酰化

2、水平，從而抑制CD11a和CD70的表達(dá)，降低CD4+T細(xì)胞的自身反應(yīng)性。然而，除DNA甲基化和組蛋白H3乙?；?，RFX1是否參與調(diào)控CD11a和CD70基因啟動(dòng)子區(qū)的組蛋白甲基化修飾狀態(tài)，目前尚未報(bào)道。本課題擬通過證實(shí)RFX1是否參與調(diào)控CD11a和CD70基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3K9三甲基化水平，從而進(jìn)一步揭示SLE發(fā)病的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制。
　　 方法：密度梯度離心分離15例SLE患者和15例健康對(duì)照組的外周血單個(gè)核細(xì)胞，磁

3、珠分選CD4+T細(xì)胞。染色質(zhì)免疫沉淀法(CHIP)和實(shí)時(shí)定量PCR來檢測(cè)H3K9三甲基化水平；免疫共沉淀(co-IP)、Western blot及間接免疫熒光染色法檢測(cè)RFX1與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶抑制同源1(SUV39H1)的相互作用；用實(shí)時(shí)定量RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)CD11a和CD70 mRNA表達(dá)水平。SUV39H1的蛋白表達(dá)水平用Western blot檢測(cè)。
　　 結(jié)果：在SLE患者CD4+T細(xì)胞中CD11a和CD70啟動(dòng)子

4、區(qū)H3K9三甲基化水平顯著降低(P<0.01)；SUV39H1蛋白表達(dá)水平在SLECD4+T細(xì)胞與健康對(duì)照之間無顯著差異(P>0.05)；co-IP實(shí)驗(yàn)和間接免疫熒光法證實(shí)CD4+T細(xì)胞中RFX1可與SUV39H1相互作用。過度表達(dá)RFX1可升高SLE患者CD4+T細(xì)胞中CD11a和CD70基因啟動(dòng)子區(qū)H3K9三甲基化水平(P<0.01)，CD11a和CD70基因表達(dá)顯著降低(P<0.01)。相反，特異性抑制RFX1表達(dá)可顯著降低正常C

5、D4+T細(xì)胞中CD11a和CD70基因啟動(dòng)子區(qū)H3K9三甲基化水平(P<0.01)，CD11a和CD70基因表達(dá)顯著升高(P<0.01)。
　　 結(jié)論：RFX1通過招募SUV39H1到CD4+T細(xì)胞的CD11a和CD70的啟動(dòng)子區(qū)域，參與調(diào)節(jié)CD11a和CD70基因啟動(dòng)子區(qū)H3K9三甲基化水平，從而調(diào)控CD11a和CD70基因表達(dá)。以上研究進(jìn)一步揭示了RFX1調(diào)控自身免疫相關(guān)基因CD11a和CD70表達(dá)的表觀遺傳機(jī)制，為全面闡明