四角蛤蜊軟體降血糖有效部位篩選與多糖的化學研究.pdf

1、本論文課題來源于國家海洋局海洋公益性行業(yè)科研專項“四角蛤蜊深加工功能性保健品的研究開發(fā)”(編號：200705009)，旨在中醫(yī)理論的指導下對四角蛤蜊軟體進行降血糖的藥效篩選和其中活性部位的化學研究，闡明四角蛤蜊軟體降血糖作用的物質(zhì)基礎，為木項目后期功能性保健品的開發(fā)提供科學數(shù)據(jù)和研究支撐。本論文主要內(nèi)容包括以下幾個部分：
　　 一.文獻研究
　　 查閱有關四角蛤蜊的研究文獻，了解四角蛤蜊的歷史沿革和現(xiàn)代研究進展；以及查閱

2、國內(nèi)外有關糖尿病、多糖類物質(zhì)降血糖的研究報告，了解多糖類成分降血糖的藥效學參數(shù)和化學特性，為進一步實驗工作奠定文獻資料基礎。
　　 二.四角蛤蜊軟體化學成分系統(tǒng)預試驗
　　 通過系統(tǒng)成分預試驗，研究四角蛤蜊軟體可能含有的化學成分。采用試管法和紙色譜法，對四角蛤蜊軟體的水提液、石油醚提取液和乙醇提取液進行成分預試，結(jié)果表明四角蛤蜊軟體中含有糖類、蛋白質(zhì)、生物堿、有機酸、甾體。
　　 三.四角蛤蜊軟體降血糖活性部位的

3、篩選
　　 1.采用水煎煮后乙醇沉淀達到一定濃度的方法，將四角蛤蜊軟體分為醇沉粗多糖和水溶性浸膏兩個提取部位，采用蒽酮-硫酸法測定四角蛤蜊醇沉粗多糖部位的總糖含量為72.9％，考馬斯亮藍法測定四角蛤蜊粗多糖部位的蛋白含量為24.1％。
　　 2.結(jié)合藥效學實驗，篩選四角蛤蜊降血糖有效部位。通過尾靜脈注射四氧嘧啶建立小鼠糖尿病模型，將四角蛤蜊醇沉粗多糖，水溶性浸膏部位各分為高低兩個劑量組給受試動物灌胃14d，用血糖儀測定給

4、藥7d和14d后空腹血糖值，并測定各組小鼠每日飲水量，每兩日的耗食量。結(jié)果顯示四角蛤蜊醇沉粗多糖部位能明顯降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖，減少糖尿病小鼠的飲水量和耗食量，水溶性浸膏部位無明顯的降血糖作用。實驗初步確定水提醇沉粗多糖部位是四角蛤蜊軟體降血糖的活性部位。
　　 四.四角蛤蜊醇沉多糖降血糖活性研究
　　 1.采用正常及糖尿病小鼠的口服糖(單糖、二糖和多糖)耐量試驗、正常小鼠的整體糖異生實驗和腎上腺素誘發(fā)的高血

5、糖小鼠模型驗證了四角蛤蜊醇沉粗多糖的降血糖活性；并考察了四角蛤蜊醇沉粗多糖對正常小鼠的空腹血糖和臟器系數(shù)的影響。結(jié)果表明四角蛤蜊醇沉粗多糖能降低腎上腺素高血糖模型動物的血糖，能顯著改善正常及糖尿病小鼠的口服糖耐量水平，抑制由L-α-丙氨酸糖異生引起的血糖升高，同時對正常小鼠空腹血糖和臟器系數(shù)無明顯影響。
　　 2.將四角蛤蜊醇沉粗多糖采用陽離子交換樹脂法精制，得到總糖含量為103.2％，蛋白含量為0.116％的四角蛤蜊精多糖。四

6、角蛤蜊精多糖的口服糖耐量試驗結(jié)果顯示其能改善正常及糖尿病小鼠的口服糖耐量水平；通過口服糖耐量試驗和四氧嘧啶糖尿病模型進一步研究四角蛤蜊精多糖和粗多糖的降血糖活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四角蛤蜊精多糖和粗多糖均顯示出顯著的降血糖作用，說明四角蛤蜊多糖是其軟體降血糖的主要活性部位：四角蛤蜊精多糖和粗多糖的降血糖時效關系研究結(jié)果表明在給藥后3～4h時降血糖效果最明顯，和模型組比較有顯著性差異。
　　 五.四角蛤蜊多糖的化學研究
　　 1.分

7、別采用了硫酸鋇比濁法、硫酸-咔唑法和乙酰丙酮法分析了四角蛤蜊粗多糖和精多糖的硫酸基、糖醛酸和氨基糖含量，結(jié)果顯示四角蛤蜊精多糖中含有硫酸基團、葡萄糖醛酸和少量氨基糖，其中硫酸基含量為2.19％，葡萄糖醛酸含量為6.91％；氨基糖含量為0.604％。四角蛤蜊粗多糖中硫酸基含量為2.28％，葡萄糖醛酸含量為5.12％。
　　 2.采用Cellulose DE52柱分離純化四角蛤蜊多糖，得到兩個均質(zhì)多糖MVPS-1和MVPS-2，其總

8、糖含量分別為109.8％和107.6％，多糖含量分別為98.82％和96.84％。運用HPGPC法測得MVPS-1和MVPS-2的重均分子量(Mw)分別為249 kDa和202kDa，多分散系數(shù)(D)分別為1.65和1.63。
　　 3.IR光譜分析結(jié)果顯示MVPS-1和MVPS-2可能是一種α型葡聚糖；采用GC/MS和GC法分析MVPS-1和MVPS-2的單糖組成，結(jié)果顯示MVPS-1和MVPS-2由葡萄糖和阿拉伯糖組成，兩者