塵肺病患者外周血中CCL18和SDC2基因表達(dá)變化.pdf

1、背景：
　　 生產(chǎn)性粉塵是嚴(yán)重威脅勞動(dòng)者健康且是我國(guó)職業(yè)工作場(chǎng)所最普遍的職業(yè)有害因素。截止到2010年,接觸生產(chǎn)性粉塵引發(fā)的塵肺病依然是我國(guó)發(fā)病率最高的職業(yè)病。2010年全國(guó)共報(bào)告塵肺病新病例23812例,報(bào)告塵肺病例數(shù)占職業(yè)病報(bào)告總例數(shù)的87.42％;其中94.21%的病例為煤工塵肺和矽肺,分別為12564例和9870例。在近三年我國(guó)每年新發(fā)職業(yè)病人群中,塵肺的新發(fā)病例幾乎維持在80～90%之間,且發(fā)病工齡有縮短的趨勢(shì)[1]。

2、我省塵肺病具有發(fā)生率高、患者群體龐大的特點(diǎn),針對(duì)此現(xiàn)狀政府部門也已出臺(tái)《河南省職業(yè)病防治規(guī)劃(2010～2015年)》,塵肺病將是未來(lái)五年我省職業(yè)病防治的重中之重。由于對(duì)塵肺患者和暴露人群尚無(wú)有效的早期診斷和有效的健康監(jiān)護(hù)方法,一經(jīng)傳統(tǒng)的X線胸片確診,病人肺部纖維化進(jìn)程已無(wú)藥物可逆轉(zhuǎn),不僅嚴(yán)重減低患者生命質(zhì)量,減少社會(huì)勞動(dòng)力,而且增加了社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此尋找能早期診斷和與塵肺病肺纖維化進(jìn)程評(píng)價(jià)相關(guān)的生物標(biāo)志物,及時(shí)發(fā)現(xiàn)高危人群并作出預(yù)警

3、,成為塵肺病早期診治的關(guān)鍵。
　　 近年來(lái)國(guó)內(nèi)外不少學(xué)者為尋找塵肺早期篩檢和肺纖維化進(jìn)程評(píng)價(jià)的生物標(biāo)志物作了不懈努力,并取得一定的成果。如在抗氧化劑、凋亡相關(guān)因子、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞因子類和基因多態(tài)性等的研究方面取得一些進(jìn)展。盡管在這些研究中有些指標(biāo)具有一定的特異性和敏感性,但需要通過(guò)肺活檢、肺灌洗或支氣管肺泡灌洗等侵入手段獲得標(biāo)本,使應(yīng)用受到很大限制。迄今為止,大部分與塵肺相關(guān)的生物標(biāo)志物在特異性和敏感性方面存在不足,未有突破性

4、進(jìn)展。因此,很有必要尋找一些新的不需要通過(guò)入侵手段就能得到的塵肺早期篩查,特別是可以用于評(píng)價(jià)和監(jiān)測(cè)肺間質(zhì)纖維化進(jìn)程的生物標(biāo)志物。
　　 多配體蛋白聚糖-2(Syndecan-2,SDC2)是一種跨膜蛋白聚糖,屬于硫酸乙酰肝素蛋白聚糖類的多配體蛋白聚糖(syndecan)家族成員,SDC2在肺組織中存在于肺巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中。趨化因子配體18(CC-chemokineligand-18,CCL18)屬CC族趨化因子,

5、在肺組織中主要有肺泡巨噬細(xì)胞分泌。已有的研究證實(shí),SDC2、CCL18等基因的高表達(dá)與肺間質(zhì)纖維化相關(guān),所以將其應(yīng)用于塵肺病肺纖維化研究,將為會(huì)塵肺病的診治提供新的分子靶點(diǎn)。
　　 本研究主要通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)SDC2和CCL18在患者血清中的蛋白濃度和血細(xì)胞中的基因表達(dá)變化,發(fā)現(xiàn)新的與塵肺病早期診斷和肺纖維化進(jìn)程評(píng)價(jià)相關(guān)的生物標(biāo)志物。同時(shí)探討塵肺病患者不同影像分期、肺功能、接觸粉塵性質(zhì)

6、(矽肺/煤工塵肺)等因素對(duì)外周血中這些基因表達(dá)的影響,建立可以用于塵肺病篩查和肺纖維化進(jìn)程評(píng)價(jià)的新分子水平血液學(xué)檢測(cè)方法,為我省塵肺病的防治研究奠定重要實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.研究對(duì)象
　　 塵肺組:77例塵肺病患者的血樣標(biāo)本取自2011年5月至10月河南省職業(yè)病防治研究院職業(yè)病科,均為男性,年齡為56.35±8.03歲。在知情同意的情況下,同時(shí)收集研究對(duì)象流行病調(diào)查表,并由專業(yè)人員進(jìn)行血樣采集。

7、r>　　 健康對(duì)照組:取同期該院162例男性健康體檢者,無(wú)粉塵接觸職業(yè)史,均排除心、腦、肝、脾、腎、肺等臟器的器官性及纖維化疾病,年齡為53.70±7.17歲。
　　 2實(shí)驗(yàn)方法
　　 2.1肺功能檢測(cè)
　　 采用日本生產(chǎn)的Autospiro-507肺功能儀對(duì)77例塵肺患者進(jìn)行肺功能測(cè)定。測(cè)定指標(biāo)為FVC(用力肺活量)、FEV1(第1秒用力肺活量,常以FEV1%表示)、一秒率(FEV1/FVC%)、最大通氣量(

8、MVV),以及各指標(biāo)的預(yù)測(cè)值。
　　 2.2 ELISA法檢測(cè)血清中CCL18和SDC2的濃度水平
　　 血清CCL18、SDC2的濃度水平檢測(cè)采用雙抗體夾心ELISA法。R&D公司進(jìn)口分裝CCL18試劑盒購(gòu)自鄭州寶信生物技術(shù)有限公司,嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作指南進(jìn)行ELISA檢測(cè),質(zhì)量控制和定標(biāo)結(jié)果均在要求范圍內(nèi)。
　　 2.3 Real-Time PCR檢測(cè)CCL18和SDC2基因的表達(dá)
　　 采用實(shí)時(shí)定量R

9、T-PCR方法,以SYBR Green法和Taqman探針?lè)ǚ謩e檢測(cè)樣本中SDC2和CCL18基因的相對(duì)表達(dá)量。分析CCL18和SDC2基因在病例組和對(duì)照組、病例組不同分期之間、矽肺/煤工塵肺之間的表達(dá)變化。
　　 3統(tǒng)計(jì)分析
　　 采用SPSS12.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用Kolmogorov-Smimov(K-S)正態(tài)性檢驗(yàn)評(píng)價(jià)病例組與對(duì)照組人群數(shù)據(jù)是否正態(tài),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.1。對(duì)于符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn),

10、非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn),分別分析對(duì)照組與病例組受檢者外周血中CCL18、SDC2基因的表達(dá)差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,以及不同影像分期、肺功能、不同接塵性質(zhì)(矽肺/煤工塵肺)等因素對(duì)這些基因表達(dá)水平的影響(α=0.05)。
　　 4結(jié)果：
　　 (1)塵肺組血清中CCL18的濃度水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均高于健康對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);塵肺組血清中SDC的濃度水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均略高于健康對(duì)照組,差異均無(wú)統(tǒng)

11、計(jì)學(xué)意義(P>0.05):
　　 (2)塵肺組中,矽肺患者血清中CCL18的濃度水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均高于煤工塵肺,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);矽肺患者血清中SDC2含量水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均略高于煤工塵肺,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05):
　　 (3)塵肺組CCL18的濃度水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均與患者肺功能損害程度有相關(guān)關(guān)系;而SDC2的血清含量水平和基因轉(zhuǎn)錄水平與患者肺功能損害程度無(wú)相關(guān)關(guān)系。
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