雌激素促進小鼠陰道組織中COX-2的表達及其誘發(fā)外陰陰道假絲酵母菌病的機制研究.pdf

1、外陰陰道假絲酵母菌?。╒ulvovaginal Candidiasis，VVC）是一種婦科常見的陰道粘膜的真菌感染性疾病，該病發(fā)病率高且治療后極易復發(fā)，對育齡婦女的身心健康造成了很大的影響。白假絲酵母菌是最常見的致病菌種，約占70%-90%。菌絲形態(tài)的白假絲酵母菌對宿主有很強的粘附和侵入能力。前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）在白假絲酵母菌形態(tài)轉(zhuǎn)化和增強其致病力過程中起重要作用。與酵母態(tài)相比，菌絲態(tài)的白假絲酵母菌

2、對宿主具有更強的粘附能力。而白假絲酵母菌在致病過程中，不僅可刺激宿主產(chǎn)生PGE2，其本身也可產(chǎn)生PGE2，兩者相互作用是造成白假絲酵母菌持續(xù)感染人粘膜的發(fā)病機制之一。環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）是調(diào)節(jié)花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素（Prostaglandins，PGS）的重要限速酶，可被性激素、生長因子及炎性因子等誘導表達，PGE2是其主要的酶促產(chǎn)物之一。
　　 近年來的動物實驗和臨床證據(jù)均表明，高雌激

3、素水平使個體對外陰陰道假絲酵母菌病的易感性增加，雌激素促進白假絲酵母菌菌絲形成及增殖，使其毒力增強。研究表明，雌激素能顯著性上調(diào)COX-2在人子宮微血管內(nèi)皮細胞和狗前列腺組織中的表達。對COX-2基因序列分析結(jié)果表明，其啟動子中含有核轉(zhuǎn)錄因子（Nuclear Factor-κB，NF-κB）結(jié)合位點。NF-κB作為一種具有多向調(diào)節(jié)功能的核轉(zhuǎn)錄因子，其信號通路的激活可以上調(diào)COX-2的表達從而促進PG的生成。白介素-1β（Interlen

4、kin-1β，IL-1β）是在免疫和炎癥反應中起核心作用的細胞因子，其能夠促進NF-κB的表達和活化?；诖耍陉幍腊准俳z酵母菌感染過程中，雌激素是否能夠上調(diào)陰道組織中COX-2的表達來促進感染形成，NF-κB、IL-1β在雌激素調(diào)控COX-2表達的過程中起到了何種作用，以及它們與COX-2表達的協(xié)同關(guān)系，這些問題都值得探討。
　　 本研究采用雌小鼠給予外源性雌激素形成假發(fā)情來建立外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型，應用免疫組化和原位

5、雜交方法在細胞水平和分子水平研究COX-2及其mRNA在小鼠陰道組織內(nèi)的表達情況，以及應用免疫組化，ELISA法觀察陰道組織中NF-κB、IL-1β表達的動態(tài)變化，以及它們與COX-2表達的協(xié)同關(guān)系，旨在研究雌激素誘發(fā)外陰陰道假絲酵母菌病的作用，藉此探討其致病的可能機制，為更有效的防治外陰陰道假絲酵母菌病提供新的思路和實驗依據(jù)。分二部分簡述如下：
　　 第一部分：雌激素誘導外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型中環(huán)氧化酶-2的表達

6、　　 目的：探討雌激素對外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型陰道組織中COX-2表達的影響及其在發(fā)病機制中的作用。
　　 方法：采用雌性昆明小鼠，預先皮下注射雌激素使其處于假發(fā)情狀態(tài)，然后接種5×106假絲酵母菌孢子構(gòu)建VVC模型（EI組），并設置雌激素處理未感染組（E組）、未用雌激素處理感染組（I組）、和空白對照組（C組）。動態(tài)觀察小鼠陰道灌洗液的真菌載荷量及菌絲生成情況，然后在接種后的不同時間點摘取小鼠陰道組織，對陰道組織進行組織

7、病理學檢查（HE染色和PAS染色），免疫組化方法檢測陰道組織中COX-2蛋白的表達情況。
　　 結(jié)果：與未用雌激素處理的I組小鼠比較，雌激素處理并接種白假絲酵母菌的EI組小鼠陰道灌洗液的真菌載量分析顯示自第2天開始可分離出高水平的cfu計數(shù)并持續(xù)到接種后第14天。EI組陰道組織病理結(jié)果發(fā)現(xiàn)自第2天至實驗結(jié)束均可見到陰道粘膜淺層有菌絲生長，陰道粘膜及粘膜下均有炎性細胞浸潤。除C組外，各組小鼠陰道組織內(nèi)第2天出現(xiàn)COX-2的陽性表達

8、，持續(xù)升高至第7天達到高峰；E組在第4、7天COX-2免疫組化檢測OD值分別為0.157±0.017和0.161±0.014，與C組（0.101±0.014和0.106±0.014）比較均具有統(tǒng)計學差異（P均<0.05）。EI和I組第7天的OD值分別達到0.275±0.059和0.234±0.063，與對照組相比明顯上調(diào)（P均<0.01），且EI組顯著高于I組（P<0.05）。
　　 結(jié)論：在外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型中，雌激

9、素能通過誘導陰道組織中COX-2的表達在其發(fā)病機制中起重要作用。
　　 第二部分：雌激素依賴的外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型NF-κB、IL-1β和COX-2 mRNA的表達及意義
　　 目的：觀察NF-κB、IL-1β和COX-2 mRNA在雌激素依賴的外陰陰道假絲酵母菌病小鼠模型中的動態(tài)變化，探討雌激素誘發(fā)VVC的可能機制。
　　 方法：預先給雌性小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇以造成并維持其假發(fā)情，再給予小鼠陰道內(nèi)注

10、入約5×106假絲酵母菌穩(wěn)態(tài)芽生孢子，來構(gòu)建VVC模型（此為EI組），并設置雌激素處理未感染組（E組）、未用雌激素處理感染組（I組）、和空白對照組（C組）。動態(tài)觀察小鼠陰道灌洗液的真菌載荷量，然后在接種后的不同時間點摘取小鼠陰道組織，應用原位雜交法檢測陰道組織中COX-2 mRNA表達水平；免疫組化檢測NF-κB的表達；ELISA法檢測組織勻漿中IL-1β的水平。
　　 結(jié)果：COX-2 mRNA在E組陰道組織的表達水平持續(xù)性明

11、顯高于C組（P<0.01），且EI組表達水平高于其它三組；接種后第4、7、14天EI組及I組小鼠的IL-1β水平高于C組（P<0.01），第7天達高峰，EI組小鼠在接種后第4、7天IL-1β表達水平明顯單純感染的I組（P<0.01）；E組NF-κB的陽性表達率從第4天開始就明顯高于C組（P<0.01），而EI組顯著高于I組（P<0.01）。
　　 結(jié)論：在雌激素依賴的VVC小鼠模型中，雌激素激活陰道組織中NF-κB信號通路上調(diào)C