2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、水稻是我國及黑龍江省重要的糧食作物,黑龍江省地處中國最北端,是世界水稻栽培的北限,低溫冷害發(fā)生頻繁。冷害可導(dǎo)致水稻大幅度減產(chǎn)。不同水稻品種耐冷性不同,培育耐冷品種是防治低溫冷害最有效的措施。研究及克隆水稻耐冷的相關(guān)基因,有利于水稻耐冷育種工作。黑龍江省普通高等學(xué)校分子生物學(xué)重點實驗室構(gòu)建了耐冷水稻空育131和冷敏感水稻龍粳11低溫脅迫數(shù)字表達譜。本研究根據(jù)低溫脅迫水稻數(shù)字表達譜,選取了與光合作用有關(guān)、低溫脅迫響應(yīng)基因OsRBCS3;分析

2、了在低溫脅迫下耐冷水稻空育131和冷敏感水稻龍粳11間OsRBCS3基因表達量;對比了OsRBCS3基因在空育131與龍粳11間的序列差異;構(gòu)建了水稻空育131 OsRBCS3基因的超量表達載體及CRISPR/Cas9敲除載體;通過遺傳轉(zhuǎn)化研究了空育131 OsRBCS3基因的功能。研究的主要結(jié)果包括:
  1.耐冷水稻空育131及冷敏感水稻龍粳11孕穗期低溫脅迫后,空育131的OsRBCS3基因表達量上調(diào)幅度大于龍粳11。從空育

3、131和龍粳11中克隆的OsRBCS3基因序列相同,CDS區(qū)均為528bp,編碼175個氨基酸。兩個水稻品種耐冷性差異可能是OsRBCS3基因表達量的不同造成的。
  2.通過Gateway克隆技術(shù)構(gòu)建水稻空育131 OsRBCS3基因超量表達載體pGWB12-R3和pGWB18-R3。同時,構(gòu)建了水稻空育131 OsRBCS3基因的CRISPR/Cas9敲除載體pVK-R3。
  3.采用根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將含有水稻空育1

4、31的OsRBCS3基因的超量表達載體導(dǎo)入到冷敏感水稻龍粳11基因組中,分別獲得陽性轉(zhuǎn)基因株系L-12為9個,L-18為10個。通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)將耐冷材料水稻空育131的OsRBCS3基因敲除,獲得陽性轉(zhuǎn)基因株系KC為5個。
  4.對轉(zhuǎn)OsRBCS3基因的龍粳11水稻進行耐冷性鑒定,超量表達OsRBCS3基因的水稻株系耐冷性較受體品種龍粳11有所提高。
  5.對陽性轉(zhuǎn)基因株系KC進行分子生物學(xué)檢測,

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