茶陵野生稻中一個耐冷候選基因OrCr3的克隆與功能分析.pdf

1、茶陵野生稻是世界分布最北的兩個野生稻居群之一，耐冷性極強(qiáng)。研究茶陵野生稻中表達(dá)出對低溫脅迫有抵抗能力的目的基因，不但可為栽培稻的對抗低溫冷害的能力提升提供基因資源，而且可加深人類對野生稻耐冷分子機(jī)制的理解，具有非常重要意義。
　　 OrCr3(Oryza rufipogon cold responsive gene3)是通過基因芯片分析從茶陵野生稻(Oryza rufipogon Griff)中發(fā)現(xiàn)的一個受低溫誘導(dǎo)而顯著上調(diào)的耐

2、冷候選基因。
　　 以茶陵野生稻信使RNA為模板，通過RT-PCR法獲得了OrCr3基因完整開放閱讀框(open reading frame)的cDNA克隆;根據(jù)它的開放閱讀框序列進(jìn)行在線預(yù)測，OrCr3基因編碼一個由369個氨基酸殘基組成的可能的山梨糖醇脫氫酶，理論分子量為39.3kD，pI=6.03，該酶催化山梨糖醇向果糖的轉(zhuǎn)變;經(jīng)蛋白質(zhì)相似性比對，其編碼蛋白與日本晴NM_001068947基因編碼的蛋白NP_0010624

3、12的氨基酸序列完全相同，相似性為100％;對OrCr3基因啟動子區(qū)域序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了多種可能與逆境應(yīng)答相關(guān)的順式作用調(diào)控元件。
　　 為了探明OrCr3這個低溫應(yīng)答基因是否具有耐冷或其它作用，構(gòu)建了由2×CaMV35S組成型啟動子驅(qū)動的pCAMBIA1300-OrCr3及pCAMBIA1301-OrCr3基因啟動子植物表達(dá)載體，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化了粳稻品種日本晴，獲得了轉(zhuǎn)OrCr3基因及其啟動子T0代水稻日本晴植株。利