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文檔簡(jiǎn)介
1、作物在生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程中難免會(huì)受到各種脅迫的影響,比如干旱、高鹽。這些脅迫能夠影響作物生長(zhǎng)和降低產(chǎn)量。然而作物已經(jīng)形成復(fù)雜的機(jī)制來(lái)應(yīng)對(duì)這種脅迫,但這是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。研究這種復(fù)雜的機(jī)制,挖掘發(fā)掘抗逆基因資源,培育抗逆高產(chǎn)新品種來(lái)應(yīng)對(duì)逆境脅迫是刻不容緩的。本研究從耐鹽大豆品種蘇協(xié)1號(hào)克隆兩個(gè)耐鹽基因GmHAL3a和GmHAL3b,對(duì)其進(jìn)行了序列比對(duì)分析,組織表達(dá)分析和非生物脅迫分析。同時(shí)構(gòu)建了這兩個(gè)基因的表達(dá)載體,并成功轉(zhuǎn)入擬南芥,用高鹽、山梨
2、醇和鋰離子處理純系后代,初步分析兩個(gè)基因在非生物脅迫反應(yīng)中的功能。此外對(duì)這兩個(gè)耐鹽基因GmHAL3a和GmHAL3b,分別克隆了兩個(gè)RNA干擾片段,構(gòu)建四個(gè)RNA干擾載體,并成功轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌EHA105中。主要研究結(jié)果如下:
1.氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)基因的蛋白序列含有和其它物種相似的保守位點(diǎn),進(jìn)化樹分析結(jié)果說(shuō)明其蛋白序列與擬南芥HAL3基因親緣關(guān)系是最高的。
2.理化性質(zhì)分析結(jié)果為,兩個(gè)蛋白都呈酸性;發(fā)
3、現(xiàn)這兩個(gè)基因都可能定位于葉綠體中;且它們都具有兩個(gè)潛在的跨膜螺旋區(qū)域。組織表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),GmHAL3a和GmHAL3b基因在苗期到開花后30天都是在根中表達(dá)量最高,開花期在葉中表達(dá)量最低,在莖中的表達(dá)量隨著植株的生長(zhǎng)是呈上升趨勢(shì)的;開花后55天之前,兩個(gè)基因在莢中的表達(dá)量都高于籽粒中,從開花后55天開始,籽粒中兩個(gè)基因的表達(dá)水平就高于莢中,開花后65天籽粒中兩個(gè)基因的表達(dá)量都達(dá)到最高值。
3.GmHAL3a和GmHAL3b
4、基因都受鹽、山梨醇和LiCl的誘導(dǎo)表達(dá),受LiCl的誘導(dǎo)表達(dá)最強(qiáng)烈。
4.將連接有GmHAL3a和GmHAL3b基因的過(guò)表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)入擬南芥,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因株系的開花時(shí)間提前,葉片中的AtHAL3a、AtHAL3b和AtHIP1基因的表達(dá)量在脅迫前后都高于對(duì)照。推測(cè)過(guò)表達(dá)GmHAL3a和GmHAL3b基因能夠激活擬南芥葉片中AtHAL3a、AtHAL3b扣AtHIP1基因的表達(dá)。
5.用NaCl、山梨醇、LiC
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