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文檔簡介
1、目的:本課題旨在通過建立動物模型,研究甲地海因溶液和人工硬腦膜對脊髓栓系松解術后硬脊膜內脊髓、神經(jīng)根粘連的預防作用,為探索臨床應用奠定實驗基礎。
方法:1.將60只雌性Wistar大鼠體重230-270克,按體重隨機分為4組:甲地海因溶液組(A)、人工硬腦膜組(B)、甲地海因溶液+人工硬腦膜組(C)、生理鹽水對照組(D);2.全部動物先分別行恥骨上膀胱造瘺,術后1周行尿流動力學和肌電圖檢查;檢查結束后2-3天行二次手術,以
2、L3為中心,依次切開各層,硬脊膜開窗約0.3cm×0.1cm大小;A組在缺損處涂布甲地海因溶液0.5ml,B組覆蓋人工硬腦膜,C組覆蓋侵泡甲地海因溶液的人工硬腦膜,D組涂布生理鹽水0.5ml。各組隨機選取5只大鼠分別于第二次術后1周,4周,8周進行尿流動力學和肌電圖檢查,然后處死大鼠,依次打開各層,按照Rydell分級標準,觀察硬脊膜內脊髓、神經(jīng)根粘連情況;分別取出整塊L2-L4節(jié)段脊柱標本,行常規(guī)脫鈣、脫水、透明及石蠟包埋,5um連續(xù)
3、切片,HE染色,根據(jù)改良Nussbaum組織學評分,光鏡下觀察硬脊膜內粘連情況,所有大鼠依據(jù)Tarlov評分標準對后肢行為學功能評價。各處理組與對照組比較采用方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
結果:1.大體標本觀察:二次術后1周,各組硬膜內可見稀疏而散在的膜性粘連,瘢痕組織與硬膜囊易鈍性分離,硬膜囊光滑、完整,Rydell分級主要為0~Ⅰ級,各組間相比無顯著性差異(P>0.05,表1)。4周時,D組硬膜內瘢痕組織
4、致密,粘連廣泛,瘢痕組織與硬膜囊不易鈍性分離,分離后硬膜囊多完整,Rydell評分集中在Ⅰ~Ⅱ級;A、B、C組評分主要為0~Ⅰ級,與D組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);A組與B、C組之間,B組與C組相比均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。8周時,D組硬膜內瘢痕組織致密,粘連廣泛,瘢痕組織與硬膜囊不易鈍性分離,分離后硬膜囊難以保持完整,Rydell分級主要為Ⅱ~Ⅲ級;A、B、C組相比粘連程度較輕,B、C組與D組差異均有統(tǒng)計學意義(P<
5、0.05);但A組與D組,B組與C組之間相比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
2.病理切片HE染色觀察:光鏡下觀察,二次術后1周時,脊髓粘連面積<25%,脊髓外膠原稀疏,瘢痕和移植物無明顯側方及后方延伸,各組Nussbaum組織學評分均為0級(見圖1),相比差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05,表2)。4周時,D組脊髓粘連面積25%~50%,硬脊膜內脊髓、神經(jīng)根粘連,膠原較致密,瘢痕側方延伸達脊髓與椎板缺損之間,或部分嵌入椎板缺損
6、,但未壓迫脊髓,評分為Ⅰ級(見圖2),A、B、C組粘連程度較輕,與D組有顯著性差異(P<0.05);A組與B、C組,B與C組之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。8周時,脊髓粘連面積>50%,脊髓外膠原致密,瘢痕包繞或伸達一側或雙側神經(jīng)根,或瘢痕嵌入椎管,脊髓受壓變形,硬脊膜內脊髓、神經(jīng)根粘連,評分為Ⅱ級(見圖3),B、C組與D組相比粘連程度較輕,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);A組與B、C組,B與C組之間亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
7、
3.后肢行為學功能評價:一次術后1周,所有實驗動物行走未見明顯異常,評分為5級;二次術后1周,各組大鼠Tarlov評分為4~5級,各組之間相比差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05,表3)。術后4周,各組均出現(xiàn)不同程度的癱瘓,后肢活動頻繁或有力,不能負重,Tarlov評分為2~3級,A、B、C組癱瘓程度與D組相比程度較輕,差異存在統(tǒng)計學意義(p<0.05);A組與B、C組,B組與C組之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。8周時,D組
8、大鼠肌力的下降呈進行性加重的趨勢,嚴重癱瘓,后肢可見輕微活動但不能做類似爬行的動作,且伴有潰瘍,Tarlov評分為1~2級,A、B、C組與D組相比癱瘓程度輕,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05);A組與B、C組,B、C組之間差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
4.尿流動力學研究:第一次術后,比較各組之間的膀胱容量,逼尿肌壓及順應性,差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05,表4)。二次術后第1周,膀胱容量增加,順應性降低,逼尿肌壓力增
9、加,各組與術前,各組間相比無顯著差異(P>0.05)。術后4周時,D組與A、B、C組相比,膀胱容量增加明顯,順應性降低,逼尿肌壓力增加,有顯著性差異(P<0.05),A組與B、C組,B組與C組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。二次術后第8周,A、B、C組與D組相比存在顯著性差異(P<0.05);A組與B、C組,B組與C組相比差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
5.體感誘發(fā)電位研究:第一次術后各組N17潛伏期,P40波
10、幅無顯著差異(P>0.05,表5)。二次術后1周時各組與術前相比,N17潛伏期延長,P40波的波幅降低,有顯著差異(P<0.05),各組間相比無顯著差異(P>0.05)。4周時,A、B、C組與D組存在顯著性差異(P<0.05);A組與B、C組,B組與C組相比差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。術后8周,A、B、C組與D組存在顯著性差異(P<0.05),A組與B、C組相比差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05),B組與C組差異有統(tǒng)計學意義(P<
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