醫(yī)用臭氧對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅作用.pdf

1、研究背景：
　　 臭氧(Ozone)具有強(qiáng)氧化性,醫(yī)用臭氧(Medical ozone,O2-O3)是利用醫(yī)用純氧制備的臭氧與純氧的混合氣體。與日常生活用和工業(yè)用臭氧不同,醫(yī)用臭氧必須具有很高純度及O3濃度劑量的可控性。臭氧濃度過高,對組織細(xì)胞具有強(qiáng)氧化毒性損傷作用:臭氧濃度過低在體內(nèi)容易被抗氧化物還原,起不到藥理學(xué)作用。臨床常用臭氧濃度為20～50μg/ml。近年,國外通用的醫(yī)用臭氧發(fā)生儀已通過SFDA批準(zhǔn)[SFDA(Ⅰ)20

2、042540177]引進(jìn)國內(nèi)臨床應(yīng)用。醫(yī)用臭氧發(fā)展有近50年歷史,但我國臨床醫(yī)生對此較陌生。在歐洲等地醫(yī)用臭氧廣泛用于治療糖尿病足、創(chuàng)傷及皮膚潰瘍的愈合、腦中風(fēng)、潰瘍性結(jié)腸炎、關(guān)節(jié)炎、椎間盤突出癥等疾病,其臨床療效得到了充分肯定。
　　 細(xì)菌感染是當(dāng)今人類面臨的常見健康問題,抗生素則是人類對抗細(xì)菌的一大革命性發(fā)明?？股氐牟磺‘?dāng)使用已經(jīng)成為很大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)問題?？股厝缤话央p刃劍,用之科學(xué)合理,可以為人類造福,不恰當(dāng)則會(huì)危害人

3、類的健康。青霉素問世后,抗生素成了人類戰(zhàn)勝病菌的神奇武器。然而,人們很快發(fā)現(xiàn),雖然新的抗生素層出不窮,但是,抗生素奈何不了的耐藥菌也越來越多,耐藥菌的傳播尤其令人擔(dān)憂,各種超級細(xì)菌層出不窮,嚴(yán)重影響人們的健康和生命。而醫(yī)用臭氧對細(xì)菌高效、廣譜、高潔及經(jīng)濟(jì)的殺滅作用,為臨床治療細(xì)菌感染提供了新的選擇。
　　 臭氧可有效殺滅或滅活水中及物體表面包括G+或G-菌、真菌、原蟲、甲型肝炎病毒(HAV)、人免疫缺陷病毒(HIV)等多種微生物

4、[1-3]。目前,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為臭氧滅活微生物的機(jī)制是通過生物化學(xué)氧化反應(yīng)而影響生物細(xì)胞中物質(zhì)的交換。具體滅活機(jī)制可能有以下3種形式:①臭氧能氧化分解細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)部的葡萄糖氧化酶;②臭氧直接與細(xì)菌、病毒發(fā)生作用.破壞其細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA,分解蛋白質(zhì)、脂質(zhì)類和多糖等大分子聚合物.使微生物的新陳代謝和繁殖過程遭到破壞；③臭氧能滲透細(xì)胞膜組織,侵入細(xì)胞膜,穿入菌體內(nèi)部,作用于外膜脂蛋白和內(nèi)部的脂多糖,使細(xì)胞發(fā)生通透性畸變,導(dǎo)致細(xì)胞溶解死亡,并且

5、使死亡菌體內(nèi)的遺傳基因、寄生菌種、寄生病毒粒子、噬菌體、支原體及熱原等溶解變性而死亡。臭氧對微生物的殺滅率受溫度、接觸時(shí)間和臭氧濃度等主要因素的影響[5,8]。醫(yī)用臭氧對細(xì)菌高效、廣譜、安全的殺滅特點(diǎn)為臨床治療細(xì)菌感染提供了新的選擇。
　　 既然臨床應(yīng)用臭氧取得了滿意的療效,為什么未見其在臨床中推廣及應(yīng)用,根本因?yàn)榫褪浅粞醯南嚓P(guān)基礎(chǔ)研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于臨床實(shí)踐,許多作用及機(jī)制尚未明了,限制了其在臨床治療領(lǐng)域的擴(kuò)展。臭氧的治療具有雙面性

6、,臭氧的氧化程度與臭氧的濃度呈正比,濃度過低療效欠佳,濃度過高則對周圍組織產(chǎn)生強(qiáng)刺激,甚至導(dǎo)致組織器官的損傷[5]。隨著相關(guān)基礎(chǔ)研究的開展,臭氧治療已逐漸得到越來越多的醫(yī)生的重視及應(yīng)用。但目前關(guān)于醫(yī)用臭氧在何種條件下對各種細(xì)菌的殺滅作用較好,對各種不同細(xì)菌的殺滅作用是否有差異,作用時(shí)間多長對細(xì)菌的殺滅效果好,又可以盡可能的減少不良反應(yīng),都是臭氧應(yīng)用于臨床需要迫切研究的問題。目前的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道并不多,本實(shí)驗(yàn)研究安全范圍內(nèi)不同濃度、不同作用

7、時(shí)間對臨床感染常見的金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺菌作用,為臨床應(yīng)用醫(yī)學(xué)臭氧提供初步依據(jù)。
　　 目的：
　　 1、研究不同濃度醫(yī)用臭氧對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅作用,以及對這兩種細(xì)菌的殺滅作用是否有區(qū)別；
　　 2、研究醫(yī)用臭氧作用時(shí)間對細(xì)菌的殺滅作用的影響,既可以對細(xì)菌有很好的殺滅作用,又能盡可能地減少不良反應(yīng)；
　　 3、為醫(yī)用臭氧的臨床應(yīng)用提供初步依據(jù)。
　　 方法
　　

8、取實(shí)驗(yàn)菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌于無菌生理鹽水制備成菌懸液,麥?zhǔn)媳葷岱ㄕ{(diào)整含菌量,以不同濃度醫(yī)用臭氧在不同時(shí)間點(diǎn)分別作用于兩種菌懸液,計(jì)算兩種細(xì)菌的殺滅率。數(shù)據(jù)以-x±s表示,采用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,用多因素析因設(shè)計(jì)方差分析對處理因素和分組作統(tǒng)計(jì)分析,用單因素方差分析對同一組間不同濃度或不同時(shí)間點(diǎn)的殺菌率進(jìn)行比較,組內(nèi)任意兩組間差異采用LSD法比較,P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果
　　 一、

9、不同濃度醫(yī)用臭氧對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅作用
　　 不同濃度醫(yī)用臭氧對金黃色葡萄球菌的殺滅率具有顯著性差異(F=5278.00,p<0.05),濃度越高對細(xì)菌的殺滅率越高,濃度為50μg/ml作用10min對金黃色葡萄球菌的殺滅率為100％。
　　 不同濃度醫(yī)用臭氧對大腸埃希菌的殺滅率具有顯著性差異(F=3293.26,P<0.05),濃度越高對細(xì)菌的殺滅率越高,濃度為50μg/ml作用10min對大腸埃希菌的

10、殺滅率為100％。
　　 二、相同濃度醫(yī)用臭氧對不同細(xì)菌的殺滅作用
　　 相同濃度醫(yī)用臭氧對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅率具有顯著性差異(F=142.88,90.93,p<0.05),30μg/ml以下濃度醫(yī)用臭氧對大腸埃希菌的殺滅率較金黃色葡萄球菌的殺滅率高,當(dāng)醫(yī)用臭氧濃度升至50μg/ml時(shí)對兩種細(xì)菌的殺滅率均為100％
　　 三、不同作用時(shí)間醫(yī)用臭氧對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅作用
　　

11、相同醫(yī)用臭氧濃度下5min和10min作用時(shí)間對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅率有明顯差異,隨作用時(shí)間的延長殺菌率增高,作用時(shí)間為10min和15min對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅率均為100％；當(dāng)醫(yī)用臭氧濃度升至30μg/ml,作用時(shí)間為10min以上時(shí)對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅率均為100％。
　　 結(jié)論
　　 一、體外實(shí)驗(yàn)中安全范圍內(nèi)的醫(yī)用臭氧對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌均有很好的殺滅作用;提示在體

12、內(nèi)作用時(shí),可考慮通過提高醫(yī)用臭氧濃度及延長作用時(shí)間,增強(qiáng)殺菌效果。
　　 二、醫(yī)用臭氧對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅作用與濃度成正比,濃度越高對細(xì)菌的殺滅作用越好;
　　 三、相同醫(yī)用臭氧濃度下對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的殺滅率隨作用時(shí)間的延長殺菌率增高；
　　 四、本研究發(fā)現(xiàn)在相同濃度(<30μg/ml)醫(yī)用臭氧作用下,大腸埃希菌的殺滅率較金黃色葡萄球菌的殺滅率好,考慮可能不同菌群對醫(yī)用臭氧的敏感度有所不