人偏肺病毒分離株蛋白質(zhì)特性及融合蛋白糖基化磷酸化分析.pdf

1、第一部分人偏肺病毒分離株蛋白質(zhì)特性的初步探討 目的：分析新近發(fā)現(xiàn)的兒童呼吸道病毒病原--人偏肺病毒(Human metapneumovirus，hMPV)中國大陸流行株，初步明確人偏肺病毒(human metapneumovirus，hMPV)主要蛋白質(zhì)的基本特性。 方法：以純化的hMPV重慶分離株CHN05-01滅活病毒為抗原，免疫家兔獲得抗血清。用此抗血清為一抗通過免疫印跡法檢測hMPV蛋白。用NetNGlyc 1.

2、0 Server、NetOGlyc 3.1 Server、NetPhos2.0 Server分析hMPV A亞型標(biāo)準(zhǔn)株 CAN97-83氨基酸序列，預(yù)測hMPV 蛋白氨基酸序列中可能的糖基化、磷酸化位點(diǎn)。 結(jié)果：ELISA檢測顯示所制備的抗血清與hMPV的蛋白反應(yīng)效價達(dá)1：500以上，可有效識別hMPV蛋白。軟件分析示G蛋白糖基化位點(diǎn)最多，而P蛋白磷酸化位點(diǎn)最多。以兔抗hMPV血清為一抗的免疫印跡法提示CHN05-01的G蛋白糖

3、基化水平較一致，與CAN99-80和CAN99-81不同，其分子量介于55至72kDa之間，約68 kDa；F蛋白F<,1>亞單位分子量介于40至55kDa，約為48 kDa。 結(jié)論：初步明確了hMPV兩個主要膜表面糖蛋白的分子量和糖化特點(diǎn)，為后續(xù)蛋白功能研究奠定了基礎(chǔ)。 第二部分人偏肺病毒F蛋白的糖基化和磷酸化位點(diǎn)預(yù)測 目的：預(yù)測人偏肺病毒F蛋白的糖基化、磷酸化位點(diǎn)。 方法：應(yīng)用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析預(yù)測hMPV

4、 4亞型代表株F蛋白氨基酸序列的N-連接、O-連接糖基化位點(diǎn)、賴氨酸殘基的ε氨基的糖基化位點(diǎn)和磷酸化位點(diǎn)。 結(jié)果：4亞型代表株F蛋白均有的保守N-連接糖基化位點(diǎn)、賴氨酸殘基ε氨基的糖基化位點(diǎn)和磷酸化位點(diǎn)。無相同的保守的O-連接糖基化位點(diǎn)。A2亞型株4個區(qū)段可能無糖基化和磷酸化位點(diǎn)。 結(jié)論：應(yīng)用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析預(yù)測了F蛋白的糖基化和磷酸化位點(diǎn)，為進(jìn)一步研究hMPV蛋白糖基化的功能及免疫學(xué)意義的研究奠定了理論基礎(chǔ)，獲得了多肽疫苗