磷酸化蛋白質(zhì)分析方法研究及其在人胎肝磷酸化蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用.pdf

1、磷酸化修飾是生物體內(nèi)最重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,蛋白質(zhì)的磷酸化與去磷酸化過程是真核細(xì)胞生命活動(dòng)最普遍的調(diào)控手段.對磷酸化蛋白質(zhì)的檢測和磷酸化位點(diǎn)的確定是認(rèn)識(shí)蛋白質(zhì)磷酸化在生命活動(dòng)中調(diào)控機(jī)制的重要參考信息,用蛋白質(zhì)組學(xué)的策略研究生物體的磷酸化修飾也是功能蛋白質(zhì)組學(xué)的重要研究內(nèi)容.由于磷酸化蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)的含量很低,對它的檢測和位點(diǎn)分析一直是個(gè)艱難的工作,而磷酸化蛋白質(zhì)的規(guī)?；治龊臀稽c(diǎn)鑒定更是磷酸化蛋白質(zhì)組研究面臨的技術(shù)挑戰(zhàn).該論文的

2、工作包括基于親和提取和生物質(zhì)譜的磷酸化蛋白質(zhì)分析方法的建立,以及規(guī)?；姿峄鞍踪|(zhì)分析技術(shù)在人胎肝磷酸化蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用.論文第一章以標(biāo)準(zhǔn)磷酸化蛋白質(zhì)為樣本建立了蛋白質(zhì)磷酸化修飾分析技術(shù)體系:以固相金屬親和色譜為基礎(chǔ)的磷酸肽親和富集技術(shù)幫助從復(fù)雜的肽混合物中篩選磷酸肽候選物;MALDI-TOF質(zhì)譜圖中的磷酸肽亞穩(wěn)離子峰輔助判斷絲/蘇氨酸磷酸化類型;對磷酸肽候選物進(jìn)行磷酸酶水解實(shí)驗(yàn)結(jié)合質(zhì)譜分析可以直接證明磷酸肽的存在;最后用串聯(lián)質(zhì)譜分

3、析結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索鑒定用來確定磷酸化位點(diǎn).論文第二章搭建了全程自動(dòng)化的固相金屬親和色譜-反相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜磷酸化蛋白質(zhì)分析平臺(tái),程序控制,方便快捷,便于根據(jù)不同樣本改變實(shí)驗(yàn)條件,優(yōu)化分析參數(shù).用標(biāo)準(zhǔn)磷酸肽考察了系統(tǒng)的性能,優(yōu)化了分析參數(shù)并應(yīng)用于重組人TRF1的體外磷酸化位點(diǎn)的鑒定,鑒定出2個(gè)磷酸化位點(diǎn),為該蛋白質(zhì)的激酶磷酸化修飾研究提供了有用的信息.論文第三章利用所建立的磷酸化蛋白質(zhì)分析方法規(guī)?；治隽巳颂ジ渭?xì)胞膜提取蛋白質(zhì)中的磷酸化