常染色體顯性多囊腎病的差異磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：開展大規(guī)模的常染色體顯性多囊腎病差異磷酸化蛋白質(zhì)分析，為探索ADPKD發(fā)病機(jī)制和尋找新型治療靶點提供有價值的信息。 方法：收集多囊腎病腎組織與正常腎組織，提取總蛋白，進(jìn)行磷酸化蛋白質(zhì)的富集。采用二維凝膠電泳分離兩組磷酸化蛋白樣品；挑選出差異點，進(jìn)行膠上酶解；反向液相色譜分離、在線電噴霧離子化串連質(zhì)譜對差異蛋白質(zhì)點進(jìn)行鑒定；SEQUEST軟件做生物信息學(xué)分析。應(yīng)用免疫沉淀和western blot進(jìn)行結(jié)果的驗證。挑選其中一種

2、差異磷酸化蛋白，上調(diào)和下調(diào)其表達(dá)后，觀察對細(xì)胞的影響。 結(jié)果：成功鑒定了包括信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、細(xì)胞骨架蛋白、能量代謝相關(guān)蛋白等38種在ADPKD腎囊腫組織中差異表達(dá)的磷酸化蛋白。免疫學(xué)驗證差異磷酸化蛋白的變化趨勢與質(zhì)譜鑒定結(jié)果一致。選取在ADPKD。腎囊腫組織高表達(dá)的蛋白Annexin Ⅱ進(jìn)行研究。初步證實了Annexin Ⅱ及其酪氨酸磷酸化在多囊腎病發(fā)病中參與促增殖效應(yīng)；下調(diào)Annexin Ⅱ或其酪氨酸磷酸化，可抑制細(xì)胞增殖、導(dǎo)致