磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)新方法的研究與應(yīng)用.pdf

1、蛋白質(zhì)磷酸化修飾是最常見，最重要的的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式，蛋白質(zhì)磷酸化和去磷酸化幾乎調(diào)節(jié)著生命活動的所有關(guān)鍵過程。同時磷酸化的失調(diào)會導(dǎo)致很多嚴重的人類疾病，如癌癥，糖尿病，心臟病，老年癡呆癥等。因此，蛋白質(zhì)磷酸化研究一直以來都是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的熱點，同時用蛋白質(zhì)組學(xué)的策略研究生物體的磷酸化修飾也是功能蛋白質(zhì)組學(xué)的重要研究內(nèi)容。由于磷酸化蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)的含量很低，對它的檢測和位點分析一直是蛋白質(zhì)組學(xué)的難點，而磷酸化蛋白質(zhì)的大規(guī)?；?/p>

2、析和位點鑒定更是磷酸化蛋白質(zhì)組研究面臨的巨大挑戰(zhàn)。神經(jīng)干細胞在生命活動中執(zhí)行了多種重要的生理功能，具有重要的理論意義和廣闊的應(yīng)用前景，因此其磷酸化研究有助于人們深入的理解和認識神經(jīng)干細胞的復(fù)雜功能以及蛋白質(zhì)磷酸化在神經(jīng)干細胞增殖，生長等生物過程中的意義。
　　 本論文的工作包括3個方面：1）基于一種全新的化學(xué)標(biāo)記試劑和生物質(zhì)譜的磷酸化蛋白質(zhì)分析方法的建立;2）磷酸化蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)分析平臺的建立;3）大規(guī)模磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)在小

3、鼠神經(jīng)干細胞磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用。
　　 第一部分以標(biāo)準(zhǔn)磷酸化蛋白質(zhì)為樣本建立了蛋白質(zhì)磷酸化修飾分析技術(shù)體系：自主設(shè)計并合成了一種新的磷酸化特異性標(biāo)記試劑MPAE(4-甲基哌嗪乙酰乙二胺);通過對肽段的酯化，標(biāo)記有效的將標(biāo)記試劑引入到磷酸化基團;最后用串聯(lián)質(zhì)譜分析區(qū)分磷酸化肽段和非磷酸化肽段，并結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索鑒定確定磷酸化位點。
　　 第二部分建立了磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)分析及其處理平臺，通過對搜庫參數(shù)進行了優(yōu)化，

4、確立了嚴格的搜尋條件，保證了結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，為大規(guī)模，高通量的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析奠定了基礎(chǔ)，此外，我們編寫了適合我們實驗方法的磷酸化定位程序，為接下來的磷酸化定位分析鋪平了道路。
　　 第三部分利用所建立的磷酸化蛋白質(zhì)分析方法大規(guī)模的分析了小鼠神經(jīng)干細胞(C17.2cell)提取的全蛋白質(zhì)中的磷酸化蛋白質(zhì)，共鑒定出337個磷酸化肽，405個磷酸化位點，分別歸屬于259個磷酸化蛋白質(zhì)，其中有18個磷酸化位點是文獻中沒有報道