t-PA-PAI-1在糖尿病腎病大鼠腎組織的表達(dá)及蟲草菌粉干預(yù)影響的研究.pdf

1、目的：
　　 觀察糖尿病腎病大鼠(Diabetic nephropathy DN)腎組織中t-PA/PAI-1與ECM主要組成部分FN，COLⅣ的表達(dá)及蟲草菌粉(cordyceps sinensis)干預(yù)后的變化，探討腎組織t-PA、PAl-1表達(dá)與ECM積聚的關(guān)系，及蟲草菌粉干預(yù)對(duì)ECM積聚的影響及可能機(jī)制。
　　 方法
　　 1.44只雄性wistar大鼠，隨機(jī)分成4組，正常組10只，模型組12只（給予鏈脲佐

2、菌素55mg/kg腹腔內(nèi)注射造模），蟲草菌粉早期干預(yù)組11只，蟲草菌粉晚期干預(yù)組11只，（模型組造模未成功1只，死1只，晚期干預(yù)組死1只）。72小時(shí)后測(cè)血糖，高于16.7mmol/L者視為糖尿病模型成功。早期干預(yù)組大鼠于成模后即開始每天給予蟲草菌粉混懸液5.0mg/kg/d灌胃，晚期干預(yù)組于成模后4周開始灌胃，蟲草劑量同早期組。正常組和模型組的大鼠分別給予等量的清水的灌胃。
　　 2.于12周時(shí)測(cè)大鼠體重，24小時(shí)尿蛋白定量（代

3、謝籠收集24小時(shí)尿），血糖，處死大鼠，眼眶取血測(cè)肌酐，尿素氮。
　　 3.取左腎稱重，常規(guī)脫水，石蠟包埋，HE、PAS染色觀察腎臟的病理結(jié)構(gòu)。
　　 4.免疫組化測(cè)腎臟t-PA，PAl-1，F(xiàn)N，COlⅣ表達(dá)。顯微圖像處理系統(tǒng)測(cè)平均光密度值表示CC、CB、ColⅣ、FN的相對(duì)含量。
　　 5.應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠腎組織t-PA、PAl-1、FN、COlⅣmRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果

4、r>　　 1.一般情況：造模后，較正常組大鼠出現(xiàn)多飲，多食，多尿，消瘦，皮毛無光澤，活動(dòng)反應(yīng)差，蟲草菌粉干預(yù)后一般情況有所好轉(zhuǎn)，早期干預(yù)組效果較晚期組為好。12周時(shí)，模型組與正常組比較（見附表1）體重明顯降低(p<0.01)；腎重/體重百分比明顯升高(p<0.01)。早期干預(yù)組與模型比較體重?zé)o明顯變化；腎重/體重百分比明顯降低(p<0.01)。晚期干預(yù)組與模型組比較體重?zé)o明顯變化；腎重/體重百分比降低(p<0.05)。早期干預(yù)組與晚期

5、干預(yù)組比較體重、腎重/體重百分比差異無顯著性。
　　 2.生化指標(biāo)結(jié)果-12周時(shí)，模型組與正常組比較（見附表1）血糖、血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白均明顯升高(p<0.01)。早期干預(yù)組與模型組比較，血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白定量均明顯改善(p<0.01)，血糖無明顯變化。晚期干預(yù)組與模型組比較血肌酐上升得到改善(p<0.05)；血尿素氮、24h尿蛋白得到明顯改善(p<0.01)，血糖無明顯變化。早期干預(yù)組與晚期干預(yù)組比較血

6、肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白的改善效果更明顯(p<0.05)。
　　 3.腎臟病理組織結(jié)果光鏡下，HE與PAS染色均顯示：與正常組對(duì)照，模型組與干預(yù)組腎小球截面積增大，系膜區(qū)增寬，部分有結(jié)節(jié)性沉積物，毛細(xì)血管壁基底膜增厚，部分腎小管擴(kuò)張，伴空泡樣變性，部分腎小管萎縮，伴單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。干預(yù)組上述病變減輕，早期干預(yù)組病理結(jié)構(gòu)改善更明顯。
　　 4.免疫組化結(jié)果：t-PA，PAl-1主要分布在腎小管基底膜，F(xiàn)N，Co

7、lⅣ主要分布在腎小球系膜區(qū)，毛細(xì)血管基底膜，腎小球囊壁，腎小管基底膜等。顯微圖像處理系統(tǒng)測(cè)平均光密度值結(jié)果（見附表2）：模型組與正常組比較t-PA表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.01)；PAl-1、FN、ColⅣ表達(dá)明顯上調(diào)(p<0.01)。早期干預(yù)組與模型組比較，t-PA表達(dá)明顯上調(diào)(p<0.01)；PAl-1、CoLⅣ表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.01)；FN表達(dá)下調(diào)(p<0.05)。晚期干預(yù)組與模型組比較t-PA表達(dá)明顯上調(diào)(p<0.01)；PAl

8、-1、FN表達(dá)下調(diào)(p<0.05)；ColⅣ表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.01)。早期干預(yù)組與晚期干預(yù)組比較PA-1、FN、ColⅣ表達(dá)改善效果更明顯(p<0.05)。
　　 5.實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果顯示：模型組與正常組比較（見附圖）t-PAmRNA表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.01)；PAl-1、FN、ColⅣ表達(dá)明顯上調(diào)(p<0.01)。早期干預(yù)組與模型組比較，t-PA表達(dá)明顯上調(diào)(p<0.01)；PAl-1、CoLⅣ表達(dá)明顯下調(diào)(p<

9、0.01)；FN表達(dá)下調(diào)(p<0.05)。晚期干預(yù)組與模型組比較t-PA表達(dá)明顯上調(diào)(p<0.01)；PAl-1、FN表達(dá)下調(diào)(p<0.05); ColⅣ表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.01)。早期干預(yù)組與晚期干預(yù)組比較PAN、FN、ColⅣ表達(dá)改善效果更明顯(p<0.05)，結(jié)果與免疫組化結(jié)果相一致。
　　 6.相關(guān)性分析顯示：M組t-PA與ColIV蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.614.P<0.05)。PAI-1與CollV蛋白表達(dá)呈正

10、相關(guān)(r=0.639，P<0.05)，與FN蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.586，P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.糖尿病腎病腎組織t-PA表達(dá)明顯減少，PAl-1表達(dá)明顯增多，存在纖溶系統(tǒng)的紊亂；這種紊亂與腎臟細(xì)胞外基質(zhì)主要成分(FN，COLIV)的積聚密切相關(guān)：t-PA與COLⅣ沉積呈負(fù)相關(guān)，PAl-1與FN，COLⅣ沉積呈正相關(guān)；提示DN時(shí)纖溶系統(tǒng)紊亂是導(dǎo)致腎臟纖維化的主要原因之一。
　　 2.蟲草菌粉干