蜘蛛多肽毒素cDNA克隆與序列分析以及敬釗纓毛蛛毒素組學(xué)研究.pdf

1、　　本文采用RACE法克隆了虎紋捕鳥(niǎo)蛛和敬釗纓毛蛛中六種多肽毒素HWTX-Ⅲ，HWTX-Ⅲa，HWTX-Ⅺ，JZTX-Ⅴ，JZTX-Ⅺ和JZTX-ⅪⅤ的cDNA。根據(jù)毒素的氨基酸序列設(shè)計(jì)RACE的引物，通過(guò)疊合3'RACE和5'RACE擴(kuò)增的序列就得到了毒素蛋白的cDNA全序列。它們都由5'UTR、開(kāi)放閱讀框和3’UTR組成，其開(kāi)放閱讀框編碼一個(gè)信號(hào)肽區(qū)域，一個(gè)成熟蛋白區(qū)域和一個(gè)介于它們之間的pro區(qū)域構(gòu)成的毒素前體?！　⌒蛄蟹治龅慕Y(jié)

2、果表明HWTX-Ⅲ，HWTX-Ⅲa與HWTX-Ⅰ，HWTX-ⅣHWTX-Ⅴ，SHL-Ⅰ的cDNAprepro區(qū)域高度相似，推測(cè)這六種毒素可能是從同一個(gè)祖先蛋白進(jìn)化而來(lái)。HWTX-ⅪcDNA序列的prepro區(qū)域和其它已克隆出來(lái)的虎紋捕鳥(niǎo)蛛cDNAprepro區(qū)域很不一致，表明HWTX-Ⅺ屬于虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素中發(fā)現(xiàn)的新毒素超家族?！　【瘁摾t毛蛛毒素cDNA的prepro區(qū)變化較大，且它們的同源性較低。JZTX-Ⅺ和JZTX-Ⅴ的cDNA序

3、列C端成熟蛋白之后，終止密碼子之前分別多余了Gly-Lys和Gly殘基.推知它們的C末端氨基酸殘基存在酰胺化修飾。　　在蜘蛛毒液中發(fā)現(xiàn)含有豐富的肽類(lèi)毒素，這些毒素在藥理學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)研究上已得到了廣泛的應(yīng)用。本文在已有的工作基礎(chǔ)上開(kāi)展了對(duì)敬釗纓毛蛛(ChilobrachisJingzhao)毒腺的毒素組學(xué)研究。蜘蛛粗毒經(jīng)分子篩層析分離后，以分子量14,000Da為界分為兩部分凍干，將分子量低于14,000Da的毒素進(jìn)行離子交換和反相色

4、譜分離。分子量低于14,000Da的毒素經(jīng)陽(yáng)離子離子交換柱后，共收集12個(gè)離子交換蜂，分別編號(hào)為C0,C1,C2...C11。每個(gè)離子交換蜂上C18反相柱脫鹽分離，其對(duì)應(yīng)的各洗脫峰編號(hào)為C0R1，C0R2...C0Rn，C1R1...．C1Rn...C11Rn。質(zhì)譜鑒定各成份的分子量，對(duì)其中的單一成份進(jìn)行Edman測(cè)序及活性測(cè)定。本文報(bào)道從該粗毒中用質(zhì)譜共鑒定了150個(gè)左右肽類(lèi)毒素分子。其中分離純化并得到氨基酸序列的共有15個(gè)毒素成分，