蜘蛛多肽毒素cDNA克隆與序列分析以及敬釗纓毛蛛毒素組學(xué)研究.pdf

1、　　本文采用RACE法克隆了虎紋捕鳥蛛和敬釗纓毛蛛中六種多肽毒素HWTX-Ⅲ，HWTX-Ⅲa，HWTX-Ⅺ，JZTX-Ⅴ，JZTX-Ⅺ和JZTX-ⅪⅤ的cDNA。根據(jù)毒素的氨基酸序列設(shè)計RACE的引物，通過疊合3'RACE和5'RACE擴增的序列就得到了毒素蛋白的cDNA全序列。它們都由5'UTR、開放閱讀框和3’UTR組成，其開放閱讀框編碼一個信號肽區(qū)域，一個成熟蛋白區(qū)域和一個介于它們之間的pro區(qū)域構(gòu)成的毒素前體。　　序列分析的結(jié)

2、果表明HWTX-Ⅲ，HWTX-Ⅲa與HWTX-Ⅰ，HWTX-ⅣHWTX-Ⅴ，SHL-Ⅰ的cDNAprepro區(qū)域高度相似，推測這六種毒素可能是從同一個祖先蛋白進化而來。HWTX-ⅪcDNA序列的prepro區(qū)域和其它已克隆出來的虎紋捕鳥蛛cDNAprepro區(qū)域很不一致，表明HWTX-Ⅺ屬于虎紋捕鳥蛛毒素中發(fā)現(xiàn)的新毒素超家族?！　【瘁摾t毛蛛毒素cDNA的prepro區(qū)變化較大，且它們的同源性較低。JZTX-Ⅺ和JZTX-Ⅴ的cDNA序

3、列C端成熟蛋白之后，終止密碼子之前分別多余了Gly-Lys和Gly殘基.推知它們的C末端氨基酸殘基存在酰胺化修飾?！　≡谥┲攵疽褐邪l(fā)現(xiàn)含有豐富的肽類毒素，這些毒素在藥理學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)研究上已得到了廣泛的應(yīng)用。本文在已有的工作基礎(chǔ)上開展了對敬釗纓毛蛛(ChilobrachisJingzhao)毒腺的毒素組學(xué)研究。蜘蛛粗毒經(jīng)分子篩層析分離后，以分子量14,000Da為界分為兩部分凍干，將分子量低于14,000Da的毒素進行離子交換和反相色

4、譜分離。分子量低于14,000Da的毒素經(jīng)陽離子離子交換柱后，共收集12個離子交換蜂，分別編號為C0,C1,C2...C11。每個離子交換蜂上C18反相柱脫鹽分離，其對應(yīng)的各洗脫峰編號為C0R1，C0R2...C0Rn，C1R1...．C1Rn...C11Rn。質(zhì)譜鑒定各成份的分子量，對其中的單一成份進行Edman測序及活性測定。本文報道從該粗毒中用質(zhì)譜共鑒定了150個左右肽類毒素分子。其中分離純化并得到氨基酸序列的共有15個毒素成分，