高糖高脂對體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：觀察高糖高脂對體外培養(yǎng)大腎小球系膜細(xì)胞的影響。
　　 方法：選用腎小球系膜細(xì)胞系（HBZY-1），常規(guī)培養(yǎng)于37 ℃，5％CO2含10％滅活胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞融合90％時進(jìn)行傳代，每2～3天傳代一次，將處于對數(shù)生長期的（2-4代）系膜細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中，含0.5％血清培養(yǎng)基同步化24h后，分組處理如下：正常對照組（5.5mM葡萄糖），高糖組（20mM葡萄糖），高脂組（5.5mM葡萄糖+0.2mM palmit

2、ate），高糖高脂組（20mM葡萄糖+0.2mM palmitate）：
　　 1.MTT法，流式細(xì)胞術(shù)測定系膜細(xì)胞增殖。
　　 2.收集各組細(xì)胞及培養(yǎng)上清液，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測試培養(yǎng)上清液中FN，TGF-β1含量。
　　 3.酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測各組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量。
　　 4.Western Blot檢測SREBP-1a、ACC和FAS蛋白含量的檢測。
　　 結(jié)果：<

3、br>　　 1.各組細(xì)胞增殖的結(jié)果：在一定時間內(nèi)，與正常對照組比較，高糖抑制細(xì)胞增殖（P＜0.01），高脂和高糖高脂能夠刺激細(xì)胞增殖（P＜0.05）。
　　 2.各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清TGF-β1、FN 含量的變化：各組細(xì)胞處理48h后，高糖組TGF-β1 含量明顯降低（P＜0.01）；高脂組，高糖高脂組TGF-β1 含量明顯升高（P＜0.01）。各組細(xì)胞處理24h后，各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清FN 含量無明顯差異；
　　 各組細(xì)

4、胞處理48h后，與同時段正常對照組比較，高糖，高脂組FN 含量無明顯差異；與同時段正常對照組比較，高糖高脂組FN 含量明顯增加（P＜0.05）
　　 3.各組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯TG含量的變化：各組細(xì)胞處理48h后，與正常對照組相比，高糖組HBZY-1細(xì)胞TG含量無明顯改變；高脂組細(xì)胞TG含量顯著增高（P＜0.05）；高糖高脂組細(xì)胞TG含量明顯增加（P＜0.01）
　　 4.各組細(xì)胞SREBP-1a、ACC和FAS蛋白的表達(dá)：

5、各組細(xì)胞處理48h后，與正常對照組相比，高脂和高糖高脂組細(xì)胞SREBP-1a、ACC和FAS蛋白的表達(dá)均明顯升高(P<0.01 or P<0.05)。與高糖，高脂組相比，高糖高脂組細(xì)胞SREBP-1a、ACC和FAS蛋白的表達(dá)均升高（P<0.05 or P<0.01）
　　 結(jié)論：在一定時間內(nèi)，高糖能夠抑制腎小球系膜細(xì)胞（HBZY-1）的增殖，而高脂、高糖高脂能夠刺激細(xì)胞增殖，增加細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量。其機(jī)制可能為高脂、高糖高脂上