貞清方對高糖環(huán)境培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細胞SREBP-1的影響.pdf

1、目的：研究貞清方對高糖環(huán)境培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細胞內(nèi)甘油三酯含量、細胞增殖、細胞外基質(zhì)、SREBP-1及其靶基因ACC、FAS的影響。
　　 方法：選用大鼠腎小球系膜細胞系（HBZY-1），常規(guī)培養(yǎng)于37℃、5％CO2含10％滅活胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液中，細胞融合90％時進行傳代，每2～3天傳代一次，將處于對數(shù)生長期的系膜細胞（2-4代）接種于培養(yǎng)板中，用不含血清的培養(yǎng)基同步化24h后，分組處理如下：正常對照組（5.5mM

2、葡萄糖）、高糖組（25mM葡萄糖）、二甲雙胍組（25mM葡萄糖+4mM二甲雙胍）、貞清方組（25mM葡萄糖+50μg/ml貞清方）培養(yǎng)48h后：
　　 1.MTT法和流式細胞術(shù)測定系膜細胞增殖；
　　 2.酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測各組細胞內(nèi)甘油三酯含量；
　　 3.酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法和免疫細胞化學法分別檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1和FN含量和各組細胞中TGF-β1和FN的蛋白表達量；

3、r>　　 4.RT-PCR檢測各組細胞SREBP-1、ACC、FAS的mRNA含量；
　　 5.Western Blot檢測各組細胞SREBP-1、ACC、FAS的蛋白表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組細胞增殖的結(jié)果：各組細胞處理48h后，與正常對照組相比，高糖組、二甲雙胍組、貞清方組均能刺激細胞增殖（P＜0.01或P＜0.05）；與高糖組比較，二甲雙胍組、貞清方組均能抑制細胞增殖（P＜0.01），且貞清方組

4、與二甲雙胍組對細胞增殖的抑制作用有明顯差異（P＜0.01）。
　　 2.各組細胞內(nèi)甘油三酯TG 含量的變化：與正常組細胞相比，高糖組、二甲雙胍組、貞清方組細胞TG 含量均顯著增加（P＜0.01）；與高糖組比較，二甲雙胍組細胞TG 含量明顯降低（P＜0.05），貞清方組細胞TG 含量顯著降低（P＜0.01）。
　　 3.各組細胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1和FN 含量和各組細胞中TGF-β1和FN的蛋白表達量：（1）TGF-β

5、1 含量的變化：與正常組比較，高糖組、二甲雙胍組、貞清方組TGF-β1 含量均明顯增加（P＜0.01）；與高糖組比較，二甲雙胍組TGF-β1 含量明顯降低（P＜0.01），貞清方組TGF-β1 含量顯著降低（P＜0.05）。（2）各組細胞FN含量的變化：與正常組比較，高糖組FN 含量明顯增加（P＜0.01）,二甲雙胍組、貞清方組FN 含量均顯著增加（P＜0.05）；與高糖組比較，二甲雙胍組和貞清方組FN含量均明顯降低（P＜0.01）。<

6、br>　　 4.各組細胞SREBP-1、ACC、FAS的mRNA表達的比較：各組細胞處理48h后，與正常對照組相比，SREBP-1、ACC的mRNA表達在高糖組、二甲雙胍組、貞清方組細胞均明顯升高（P＜0.01），而FAS基因的mRNA表達只在高糖組明顯升高（P＜0.01）；與高糖組比較，SREBP-1、FAS的mRNA表達在二甲雙胍組、貞清方組細胞均明顯降低（P＜0.01），而ACC的mRNA表達僅在二甲雙胍組明顯降低（P＜

7、　　 0.01）。
　　 5.各組細胞SREBP-1、ACC、FAS 蛋白表達的比較：各組細胞處理48h后，與正常對照組相比，高糖組、二甲雙胍組、貞清方組細胞SREBP-1、ACC、FAS 蛋白的表達均明顯升高（P＜0.01 or P＜0.05）；與高糖組比較，二甲雙胍組、貞清方組細胞SREBP-1、ACC、FAS 蛋白的表達均明顯降低（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：貞清方能顯著抑制高糖環(huán)境培養(yǎng)下的大鼠腎小球系膜細胞內(nèi)