高糖環(huán)境對大鼠腎小球系膜細胞AMPK表達及活性的影響.pdf

1、目的：腎小球系膜細胞形態(tài)和功能異常是糖尿病腎病重要的病理基礎。尋找有效措施阻斷、甚至逆轉(zhuǎn)系膜細胞的功能異常是臨床防治糖尿病腎病的重要策略之一。新近研究發(fā)現(xiàn)，高糖環(huán)境下的腎小球上皮細胞AMPK活性明顯降低，腎小球上皮細胞明顯的增生和肥大。而這一機制是否也參與了糖尿病狀態(tài)下系膜細胞的增生還不清楚。本實驗觀察高糖環(huán)境下系膜細胞AMPK表達和活性的變化，以及這種變化與系膜細胞增生的關(guān)系；在此基礎上，應用特異性AMPK激活劑AICAR，觀察其是否

2、對高糖環(huán)境誘導的系膜細胞異常具有保護作用。 方法： 1.高糖環(huán)境的建立：分別采用DMEM低糖與高糖細胞培養(yǎng)基，其中糖濃度5．6mmol/L為對照組、濃度為22．0mmol/L為高糖組。 2.實驗分組：對照組（糖濃度5．6mmol/L），高糖組（糖濃度22．0mmol/L），低濃度AICAR組（高糖+0．5mmol/LAICAR），高濃度AICAR組（高糖+1．0mmol/LAICAR）。 3.系膜細胞增殖

3、與細胞周期的檢測：應用MTT法檢測細胞增殖；流式細胞儀檢測細胞周期。 4.AMPK表達和活性測定：采用RT-PCR方法測定AMPKα1、α2亞單位mRNA水平；Westernblot方法測定總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKa蛋白水平。 結(jié)果： 1.高糖環(huán)境對細胞增殖和細胞周期的影響：MTT顯示，與對照組相比，高糖組系膜細胞表現(xiàn)明顯增殖趨勢；流式細胞學結(jié)果顯示，與對照組相比，高糖組G1期細胞百分數(shù)降低，S期的細

4、胞百分數(shù)增高，G2期細胞百分數(shù)降低，三個時期都有明顯的統(tǒng)計學差別，表明高糖環(huán)境促進細胞DNA合成； 2.高糖環(huán)境對細胞AMPK表達和活性的影響：系膜細胞在高糖濃度下AMPKα1、α2亞單位的mRNA水平均低于對照組：利用Westernblot方法測定的總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平也低于對照組；表明，高糖環(huán)境下系膜細胞AMPK的表達及活性均受到抑制； 3.AMPK激活劑AICAR對高糖環(huán)境中細胞增殖和細胞

5、周期的影響：MTT顯示，AICAR可以抑制高糖濃度下系膜細胞的增殖，并且呈現(xiàn)濃度依賴性；流式細胞學顯示，AICAR組細胞S期百分數(shù)下降，G1期百分數(shù)上調(diào)。表明AICAR可抑制細胞DNA合成期； 4.AICAR對高糖環(huán)境中細胞AMPK表達和活性的影響：與高糖組相比，AICAR組AMPKα1、α2亞單位的mRNA表達增強，總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平也較高；表明，AICAR可以增強高糖環(huán)境下系膜細胞AMPK的表達及