Septin2對大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：探討Septin2基因表達(dá)變化對大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響。
　　 方法：培養(yǎng)原代大鼠腎小球系膜細(xì)胞，進(jìn)行以下實驗：1)將綠色熒光蛋白表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1用電穿孔轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入細(xì)胞，24h后熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況。2)質(zhì)粒電穿孔轉(zhuǎn)染：細(xì)胞分組：①pRK5空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，②pRK5-Septin2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，分別進(jìn)行電穿孔轉(zhuǎn)染，Westernblot檢測兩組細(xì)胞Septin2蛋白質(zhì)表達(dá)水平，流式細(xì)胞儀分析S

2、eptin2對細(xì)胞周期進(jìn)程的影響，Western blot檢測系膜細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白(cyclinD1、cyclinE、p21)的表達(dá)變化。3)設(shè)計合成GAPDH的siRNA，依不同濃度分為①200nmol/L，②400nmol/L，③800nmol/L組，④無關(guān)對照轉(zhuǎn)染組(siCon)，電穿孔轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48h，Western blot檢測GAPDH蛋白質(zhì)表達(dá)變化。4)siRNA電穿孔轉(zhuǎn)染：細(xì)胞分組：①無關(guān)對照轉(zhuǎn)染組(Sicon)；②si

3、Septin2轉(zhuǎn)染組。收集細(xì)胞蛋白，Western blot檢測兩組細(xì)胞Septin2蛋白質(zhì)表達(dá)水平，流式細(xì)胞儀分析siSeptin2對細(xì)胞周期進(jìn)程的影響。
　　 結(jié)果：1)在80μg質(zhì)粒，340V電壓、550μF電容的電穿孔條件下，原代大鼠腎小球系膜細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到50％以上；2)與pRK5空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，pRK5-Septin2質(zhì)?？墒瓜的ぜ?xì)胞Septin2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平明顯提高(P＜0.05)，流式細(xì)胞儀檢測發(fā)

4、現(xiàn)pRK5-Septin2質(zhì)粒使G0/G1期細(xì)胞百分比明顯增多而S期細(xì)胞百分比顯著減少(P＜0.05)，同時細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白cyclin D1、cyclinE表達(dá)水平下調(diào)，p21的表達(dá)水平上調(diào)(P＜0.05)；3)siGAPDH濃度為800nmol/L時蛋白質(zhì)水平抑制效果最為顯著(P＜0.05)；4)與無關(guān)對照轉(zhuǎn)染組(siCon)比較，siSeptin2轉(zhuǎn)染組Septin2蛋白質(zhì)表達(dá)水平明顯降低，流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示兩組細(xì)胞G0/G1