蟲(chóng)草多糖抑制腎小球系膜細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、腎小球是腎的濾過(guò)單位，各種原發(fā)或繼發(fā)腎小球疾病均能引起腎小球功能失常，腎小球系膜細(xì)胞(Human mesangial cell，HMC)、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞參與了大多數(shù)病理過(guò)程。在腎小球疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中系膜細(xì)胞作用很關(guān)鍵。在炎癥、免疫復(fù)合物等病理因素刺激下，系膜細(xì)胞活化，表現(xiàn)出活躍的增殖狀態(tài)，導(dǎo)致系膜區(qū)增寬、毛細(xì)血管拌受壓、蛋白質(zhì)濾過(guò)增加、腎小球?yàn)V過(guò)率下降。抑制系膜細(xì)胞過(guò)度增殖是治療腎炎，防止腎小球硬化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。蟲(chóng)草多糖是冬蟲(chóng)夏

2、草中提取出來(lái)的活性物質(zhì)，具有抗氧化，免疫調(diào)節(jié)，消炎，降血糖等作用，因而具有良好腎臟保護(hù)作用。本研究在體外培養(yǎng)的系膜細(xì)胞基礎(chǔ)上探討蟲(chóng)草多糖抑制細(xì)胞細(xì)胞增殖的可能的作用機(jī)制，為蟲(chóng)草多糖延緩慢性腎小球腎炎疾病進(jìn)展提供依據(jù)。
　　一、蟲(chóng)草多糖活性片段的制備及檢測(cè)
　　以實(shí)驗(yàn)室分離得到的酸性蟲(chóng)草多糖(CPS2)為原料，在體外模擬的人工胃液中水解12h，得到蟲(chóng)草多糖活性片段，分析其分子量及單糖組成，并采用MTT法篩選其作用濃度。結(jié)果顯示

3、:酸性蟲(chóng)草多糖經(jīng)人工胃液水解12h得到的樣品是相對(duì)分子質(zhì)量為2.38×104Da，純度為98.75％的純凈多糖，是含葡萄糖、甘露糖、半乳糖、核糖的雜多糖。
　　二、MTT法檢測(cè)蟲(chóng)草多糖對(duì)PDGF-BB誘導(dǎo)的HMC細(xì)胞增殖的影響
　　采用MTT法篩選PDGF-BB造模、CPS-F最佳的工作濃度以及CPS-F對(duì)PDGF-BB誘導(dǎo)下HMC增殖的影響。結(jié)果顯示:PDGF-BB最佳濃度為50ng/ml;CPS-F單獨(dú)作用正常HMC時(shí)對(duì)

4、細(xì)胞增殖影響不大，但在200μg/ml時(shí)有一定藥毒性;CPS-F作用于PDGF-BB誘導(dǎo)的HMC時(shí)，在25μg/ml即有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*P＜0.05)，濃度為50μg/ml極顯著差異（＃＃P＜0.01）。提示CPS-F可抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的HMC增殖，而對(duì)正常HMC作用不明顯。
　　三、采用Western blot及流式細(xì)胞術(shù)分析對(duì)細(xì)胞周期的影響
　　運(yùn)用不同濃度的CPS-F（25μg/ml，50μg/ml，100μg/m

5、l）作用于PDGF-BB誘導(dǎo)的HMC細(xì)胞，采用Western blot技術(shù)檢測(cè)其周期蛋白(CDK-4、cyclinD1)表達(dá)水平，并利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)程的影響進(jìn)行觀察。結(jié)果顯示:CPS-F可顯著抑制CDK-4、cyclinD1蛋白表達(dá)水平，但其對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)程的影響不大。
　　四、觀察蟲(chóng)草多糖對(duì)系膜細(xì)胞自分泌因子（TNF-α、MCP-1）的影響
　　采用Western blot，檢測(cè)不同濃度的CPS-F對(duì)PDGF

6、-BB誘導(dǎo)細(xì)胞自分泌的炎癥因子的標(biāo)志物（TNF-α、MCP-1）的影響。結(jié)果顯示:各濃度蟲(chóng)草多糖(25μg/ml，50μg/ml，100μg/ml)均可顯著抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的HMC細(xì)胞炎癥因子的釋放。
　　通過(guò)上述研究，證實(shí)了CPS-F可以抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖，可降低PDGF-BB誘導(dǎo)下HMC自分泌蛋白（TNF-α、MCP-1)的表達(dá)，表明CPS-F抑制PDGF-BB引起的HMC增殖，可能是通過(guò)阻止PDGF-