不同鈣離子通道阻滯對(duì)腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、前言：腎小球系膜由腎小球系膜細(xì)胞(glomerularmesangialcell，GMC)及腎小球內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)組成。腎小球系膜的病理變化是最終導(dǎo)致腎小球硬化，促使腎功能衰竭的基礎(chǔ)。系膜細(xì)胞為腎小球的固有細(xì)胞，在多種免疫和非免疫腎小球進(jìn)行性損傷中均可觀察到系膜細(xì)胞的增殖。腎小球系膜細(xì)胞(GMC)數(shù)量的增加將顯著地影響著大分子物質(zhì)通過系膜區(qū)，導(dǎo)致大分子物質(zhì)在系膜區(qū)局部沉積，并由于腎小球系膜細(xì)

2、胞數(shù)量的增加，通過對(duì)腎小球毛細(xì)血管壁的擠壓作用，形成毛細(xì)血管腔的機(jī)械阻塞，降低腎小球的濾過率。如何控制腎小球系膜細(xì)胞(GMC)的增殖對(duì)于腎小球損傷的逆轉(zhuǎn)和防止腎小球疾病的慢性演變有重要意義。 關(guān)于鈣通道阻滯劑(calciumchannelblocker，CCB)的腎臟保護(hù)作用，是目前研究的熱點(diǎn)之一。鈣通道阻滯劑(CCB)除其血液動(dòng)力學(xué)效應(yīng)能夠降壓外，尚存在直接的腎臟保護(hù)機(jī)制，其機(jī)制目前尚不十分明確，其中鈣通道阻滯劑(CCB)抗系

3、膜增殖的地位在腎保護(hù)作用中可能更為重要，值得進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)以大鼠腎小球系膜細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，在無菌室內(nèi)培養(yǎng)增殖，建立腎小球系膜細(xì)胞增殖模型，觀察不同鈣離子通道阻滯劑對(duì)腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響。闡明鈣通道阻滯劑(CCB)保護(hù)腎臟的作用及機(jī)制。 大量研究表明，多種因素影響到系膜細(xì)胞的增殖，其中包括促進(jìn)性因素及抑制性因素。研究已證實(shí)血小板源生長(zhǎng)因子(Plateletderivedgrowthfactor，PDGF)有促進(jìn)系膜細(xì)胞增殖

4、的作用，而白細(xì)胞介素-10(interleukins-10，IL-10)有抑制系膜細(xì)胞增殖的作用。目前，尚無通過研究鈣通道阻滯劑(CCB)影響IL-10和PDGF的表達(dá)來研究其對(duì)腎小球系膜細(xì)胞(GMC)增殖的影響的報(bào)道，因此，我們擬通過研究不同鈣通道阻滯劑(CCB)在不同濃度下對(duì)腎小球系膜細(xì)胞(GMC)的白細(xì)胞介素-10(IL-10)及血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)表達(dá)的影響，來探討鈣通道阻滯劑(CCB)對(duì)腎小球系膜細(xì)胞(GMC)增殖的作

5、用。 實(shí)驗(yàn)材料與方法 1、在無菌室中進(jìn)行大鼠腎小球系膜細(xì)胞(GMC)的復(fù)蘇、傳代、培養(yǎng)。2、無菌室內(nèi)取生長(zhǎng)較好的第四代腎小球系膜細(xì)胞(GMC)，接種于六孔板，加蓋玻片。24小時(shí)后腎小球系膜細(xì)胞(GMC)長(zhǎng)滿玻片，換成無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，加入不同種類不同濃度的鈣通道阻滯劑(CCB)(每組12個(gè)孔)，同時(shí)2個(gè)對(duì)照孔不加藥，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。 3、無菌室外依照說明書對(duì)玻片進(jìn)行SABC免疫組化染色。 4

6、、應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖象分析系統(tǒng)通過顯微鏡對(duì)上述處理過的玻片進(jìn)行定量分析。 結(jié)果 1、IL-10及PDGF染色陽性細(xì)胞表現(xiàn)為胞漿內(nèi)程度不同地分布的棕色顆粒； 2、對(duì)于IL-10組，維拉帕米和佩爾地平濃度增大，則表達(dá)增多； 3、對(duì)于PDGF組，維拉帕米和佩爾地平濃度增大，則表達(dá)減少； 4、同一濃度維拉帕米和佩爾地平作用下，實(shí)驗(yàn)組的IL-10表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)； 5、同一濃度維拉帕米和

7、佩爾地平作用下，實(shí)驗(yàn)組的PDGF表達(dá)顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)； 6、相同濃度下，維拉帕米和佩爾地平之間的IL-10或PDGF表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)； 7、同一鈣通道阻滯劑(CCB)不同濃度下，IL-10或PDGF的表達(dá)呈劑量依賴性趨勢(shì)。 結(jié)論 1、維拉帕米和佩爾地平均對(duì)大鼠腎小球系膜細(xì)胞(GMC)的PDGF表達(dá)有抑制作用，而對(duì)IL-10的表達(dá)有促進(jìn)作用，提示其對(duì)腎小球系膜細(xì)胞(GMC)的增殖