青蒿琥酯對脂多糖誘導的大鼠腎小球系膜細胞增殖的影響及機制探討.pdf

1、腎小球系膜細胞(GMC)增殖是許多腎小球疾病常見的病理改變。GMC增殖可引起細胞外基質(ECM)過量生成和聚集，并最終導致腎小球硬化(GS)、腎臟纖維化及終末期腎功能衰竭。設法控制系膜細胞增殖對爭取逆轉腎小球損傷、防止腎臟疾病向慢性化演變具有重要意義。近年來研究表明青蒿素類藥物藥理學作用多樣，可顯著抑制腫瘤細胞的增殖并誘導其凋亡，并且對皮膚瘢痕、肝臟纖維化組織等具有明顯抗纖維化作用。本研究觀察了青蒿琥酯(Art)對脂多糖誘導的大鼠腎小球

2、系膜細胞增殖的影響，并進一步從細胞周期、細胞凋亡及其調控蛋白表達等層面探討青蒿琥酯抑制腎小球系膜細胞增殖的可能機制，旨在從細胞水平初步探討青蒿琥酯治療腎小球疾病的作用機制，為臨床更好的將青蒿素類藥物應用于預防、治療腎小球硬化、腎臟纖維化提供實驗依據。 方法： 1．應用體外細胞培養(yǎng)技術，培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細胞(GMC)，選擇脂多糖(LPS)作為誘導物。設立正常對照組、LPS對照組、青蒿琥酯不同濃度組進行實驗。 2．

3、應用MTI、法觀察青蒿琥酯對GMC增殖的影響，計算藥物抑制率，繪制細胞生長曲線；免疫細胞化學染色結合計算機圖文分析系統(tǒng)檢測增殖細胞核抗原PCNA的表達情況。 3．應用流式細胞術檢測青蒿琥酯對GMC細胞周期的影響；免疫細胞化學染色結合計算機圖文分析系統(tǒng)檢測細胞周期素激酶抑制劑P27蛋白的表達情況。 4．通過形態(tài)學觀察、熒光染色及流式細胞術檢測青蒿琥酯對GMC凋 亡的誘導作用；免疫細胞化學染色結合計算機圖文分析系統(tǒng)檢測凋亡蛋

4、白Bcl-2的表達情況。結果： 1． MTI實驗顯示：與正常對照組相比，LPS具有明顯誘導GMC增殖的作用(P<0.05或P<0.01)；青蒿琥酯作用24、48、72h，GMC增殖水平均可受到抑制(P<0.05或P<0.01)，且隨藥物濃度增大、作 用時間延長，抑制作用增強，高濃度組(60mg/L)72h抑制率可達51.18％。細胞PCNA免疫化學染色結果顯示，LPS可上調PCNA表達(P<0.01)，而青蒿琥酯作用48h

5、，細胞PCNA表達明顯下降(P<0.05或P<0.01)，且高濃度組作用強于低濃度組(P<0.01)。 2．對細胞周期的分析發(fā)現(xiàn)，L2S具有誘導細胞進入S期的作用；而青蒿琥酯干預48h后，細胞有絲分裂被阻滯于Go期，S期細胞比例下降，Go期細胞比例增加(P<0.05或P<0.01)。P27免疫細胞化學染 色結果顯示，LPS組P27表達下降(P<0.01)，青蒿琥酯作用48h，P27表達明顯上調(P<0.01)，且高濃度組作

6、用強于低濃度組(P<0.01)。 3．青蒿琥酯作用48h后，倒置相差顯微鏡下觀察可見細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，HE染色可見凋亡細胞產生，DAPI著染可見細胞核固縮、凋亡小體形成。流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)亞二倍體凋亡峰形成，60mg/L青蒿琥酯作用48h細胞凋亡率可達34.3％。Bcl-2免疫細胞化學染色結果顯示，青蒿琥酯可明顯下調Bcl-2的表達(P<0.05或：P<0.01)， 且高濃度組作用強于低濃度組(P<0.01)。