EPA、DHA對(duì)脂多糖刺激大鼠系膜細(xì)胞的影響.pdf

1、目的: 通過制備脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)致大鼠腎小球系膜細(xì)胞(glomerularmesangial cells，GMCs)損傷模型，研究二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)對(duì)GMCs的增殖、凋亡以及炎癥反應(yīng)的影響，探討其可能的作用機(jī)制。 方法與結(jié)果: 1.EPA、DHA對(duì)正常GMCs增

2、殖的影響體外培養(yǎng)小鼠GMCs，MTT法觀察藥物對(duì)其增殖的影響：取第3代細(xì)胞計(jì)數(shù)后按5x103/孔轉(zhuǎn)種于96孔板，然后分為：正常對(duì)照組；EPA(10-2mmol.L-1、10-1mmol·L-1)組；DHA(10-2mmol·L-1、10-1mmol·L-1)組；分別培養(yǎng)24h、48h、72h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況及藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，在37℃培養(yǎng)條件下，用藥組和正常組細(xì)胞增殖無明顯差異。 2.EPA、DHA對(duì)L

3、PS刺激的GMCs增殖的影響取第3代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，然后分為：正常對(duì)照組；LPS組(10％FCS，LPS終濃度為10μg·mL-1)；EPA(10-2mmol.L-1、10-1mmol.L-1)組；DHA(10-2mmol.L-1、10-1mmol·L-1)組；分別培養(yǎng)24h、48h、72h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況及藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，在37℃培養(yǎng)條件下，和正常組相比LPS組細(xì)胞增殖增強(qiáng)(P<0.01)，EPA、DHA各濃

4、度組均能抑制GMCs的過度增殖且呈劑量依賴性(P<0.01,P<0.01)。 3.EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs凋亡的影響根據(jù)凋亡試劑盒測(cè)試LPS處理組與空白對(duì)照組相比，凋亡率顯著減少，10-1mmol·L-1的EPA和DHA處理組與LPS組相比，凋亡率分別增加3.32％、9.01％。 4.EPA、DHA對(duì)正常GMCs抗氧化系統(tǒng)的影響SOD、MDA、GSH-PX的檢測(cè)均依照試劑盒說明檢測(cè)。結(jié)果顯示在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，用藥組

5、SOD、MDA、GSH-PX活性與正常組無明顯差異。 5.EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs抗氧化系統(tǒng)的影響SOD、MDA、GSH-PX的檢測(cè)均依照試劑盒說明檢測(cè)。結(jié)果顯示在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，LPS組SOD活性明顯低于對(duì)照組(P<0.01,P<0.05)，加EPA、DHA后，SOD活性明顯升高(P<0.01)；LPS組MDA含量明顯高于對(duì)照組<0.01，P<0.05)：加入EPA、DHA后，MDA含量明顯下降(P<0.01，P<0.0

6、5)；LPS組GSH-PX活性明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；加EPA、DHA后，GSH-PX活性明顯升高(P<0.01,P<0.05)。 6.免疫組化法檢測(cè)EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)的影響免疫組化結(jié)果顯示，LPS刺激GMCs 48h使細(xì)胞分泌MCP-1增加。正常組細(xì)胞的胞漿區(qū)幾乎沒有染色，LPS組的細(xì)胞則可見明顯的黃

7、染。用藥組均能使MCP-1減少。 7.免疫組化法檢測(cè)EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)的影響免疫組化結(jié)果顯示，LPS刺激GMCs48h使細(xì)胞分泌TGF-β1增加。正常組細(xì)胞的胞漿區(qū)幾乎沒有染色，LPS組的細(xì)胞則可見明顯的黃染。用藥組均能使TGF-β1減少。 結(jié)論: 1.EPA和DHA能抑制GMCs的過度增殖并促進(jìn)其凋亡。