高產(chǎn)與低產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋高峰期卵巢組織基因差異表達(dá)的研究.pdf

1、養(yǎng)禽業(yè)是我國畜牧業(yè)中集約化、社會化程度最高、創(chuàng)匯最多的行業(yè)之一，而養(yǎng)雞業(yè)則引導(dǎo)了養(yǎng)禽業(yè)的主要發(fā)展方向。蛋雞的選育與整個家禽業(yè)的發(fā)展水平密切相關(guān)。隨著蛋雞選育程度的不斷提高，育種進(jìn)展變得十分緩慢。近年來，分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，為從分子水平上尋找影響產(chǎn)蛋量的基因，從而加速育種進(jìn)展奠定了基礎(chǔ)。本研究以農(nóng)大粉殼蛋雞的高產(chǎn)群與低產(chǎn)群為研究對象，在產(chǎn)蛋高峰期的兩個雞群中分別隨機(jī)抽取各8個個體，提取每個個體的總RNA，采用mRNA差異顯示(DD

2、RT-PCR)技術(shù)，研究了蛋雞高產(chǎn)群與低產(chǎn)群卵巢組織的差異表達(dá)基因及其相關(guān)基因的差異表達(dá)模式，旨在(1)揭示蛋雞高產(chǎn)與低產(chǎn)群產(chǎn)蛋高峰期卵巢組織的基因差異表達(dá)信息；(2)分析影響蛋雞產(chǎn)蛋量的遺傳因素；(3)從分子水平上探討與蛋雞產(chǎn)蛋量有關(guān)的遺傳因素及其作用機(jī)理，從而為通過遺傳手段改良和選育高產(chǎn)蛋雞奠定基礎(chǔ)。 生產(chǎn)性能數(shù)據(jù)分析顯示，蛋雞高產(chǎn)群與低產(chǎn)群之間在32周齡產(chǎn)蛋數(shù)性狀和腹脂重性狀上差異極顯著(p＜0.01)；而兩個雞群在蛋重、

3、蛋殼厚度、蛋白高度、蛋形指數(shù)、殼重、蛋白重、蛋黃重等蛋品質(zhì)性狀以及活重、去毛重、去四肢重、腸長、全凈膛重等屠體性狀之間差異不顯著。 mRNA差異顯示結(jié)果表明：(1)15對引物組合在2個試驗雞群的32周齡卵巢組織中，共擴(kuò)增出336條cDNA片段，其中能夠重現(xiàn)的有249條，重現(xiàn)率為74.01％。平均每對引物可擴(kuò)增的總條帶數(shù)為22.40條，能夠重現(xiàn)的為16.60條?？偛町悧l帶數(shù)為59條，占可重現(xiàn)條帶數(shù)的23.69％。平均每對引物組合可

4、以擴(kuò)增出3.93條差異表達(dá)片段；(2)59條為差異表達(dá)片段，可以劃分為5種差異表達(dá)模式：超強(qiáng)表達(dá)、減弱表達(dá)、沉默表達(dá)(或不表達(dá))、特異表達(dá)和共表達(dá)；(3)雜交驗證與克隆測序的3條差異片段都分別與HoxBa、Ca、Dbclusters序列高度同源；(4)從現(xiàn)有研究結(jié)果中可以得知，HoxA-10與雌性動物的繁殖有著非常密切的聯(lián)系，據(jù)資料可以推測，HoxBa，Ca，Db很可能是由HoxA-10突變而來；(5)蛋雞高產(chǎn)與低產(chǎn)群的卵巢組織存在較為

5、顯著的基因表達(dá)差異，表現(xiàn)在質(zhì)和量兩個方面；(6)促卵泡素受體(FSHR)和催乳素受體(PRLR)基因在蛋雞高產(chǎn)群與低產(chǎn)群32周齡的卵巢組織中都表達(dá)，但其表達(dá)量的具體差異尚需要通過定量PCR技術(shù)進(jìn)一步確定。 本研究在前人研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對DDRT-PCR技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化和改進(jìn)，從總RNA的提取到PAGE圖譜的顯示，每一個關(guān)鍵步驟都反復(fù)做了大量的對比實(shí)驗。通過對PCR參數(shù)中的退火溫度、延伸時間、dNTP濃度等多個關(guān)鍵因素進(jìn)行分析，