疏肝健脾法促進(jìn)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠生長(zhǎng)因子表達(dá)的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:胃潰瘍(GU)是一種全球性常見的消化系統(tǒng)疾病，多由于幽門螺桿菌(HP)、藥物及飲食因素、應(yīng)激精神因素等原因?qū)е挛杆岱置谶^(guò)多、胃蛋白酶消化自身胃壁，致使胃黏膜組織受損而形成的疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約10％的人一生中患過(guò)消化性潰瘍。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，胃潰瘍屬于典型的身心疾病，不良的情緒應(yīng)激可影響胃腸生理功能，是導(dǎo)致潰瘍癥狀復(fù)發(fā)或加劇的重要因素。胃炎飲為全國(guó)名老中醫(yī)藥專家楊牧祥教授的經(jīng)驗(yàn)方，具有疏肝健脾，和胃降逆的功效。本次研究通過(guò)觀察胃炎飲對(duì)

2、胃潰瘍大鼠胃黏膜病理形態(tài)、潰瘍面積和表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及其mRNA表達(dá)的影響，以探討疏肝健脾法促進(jìn)潰瘍愈合和防止復(fù)發(fā)的作用機(jī)制。
　　方法:參照文獻(xiàn)，應(yīng)用冰醋酸腐蝕法制作胃潰瘍大鼠模型。清潔級(jí)wistar大鼠50只，雄性，體重為200-220g，購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)抽取8只大鼠作為假手術(shù)組，剩余42只參與造模。
　　在造模完成后第3天，

3、除去死亡大鼠，確認(rèn)模型復(fù)制成功后，將存活大鼠隨機(jī)抽取32只，分為模型對(duì)照組（簡(jiǎn)稱“模型組”）、奧美拉唑陽(yáng)性對(duì)照組（簡(jiǎn)稱“對(duì)照組”）、胃炎飲高劑量組（簡(jiǎn)稱“胃高組”）、胃炎飲低劑量組（簡(jiǎn)稱“胃低組”），每組為8只。各治療組大鼠按10ml/kg體重藥液分別灌胃給藥，胃高組灌服濃度為2.14g生藥/ml的胃炎飲的藥液，胃低組灌服濃度為1.07g生藥/ml體重的藥液，對(duì)照組灌服濃度為0.368mg/ml的奧美拉唑腸溶膠囊藥液。假手術(shù)組、模型組大

4、鼠按照10ml/kg體重灌胃生理鹽水。上述各組每天灌藥或生理鹽水1次，共治療14天。
　　在給藥治療過(guò)程中，觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、毛發(fā)光澤及活動(dòng)、進(jìn)食情況。最后一次灌胃給藥后禁食24小時(shí)，斷頭處死，無(wú)菌操作剖腹取胃組織，沿胃大彎剪開，以冰生理鹽水沖洗干凈，先肉眼觀察胃粘膜的大體形態(tài)，再使用游標(biāo)卡尺量取潰瘍的最大長(zhǎng)徑與垂直最大寬徑，計(jì)算潰瘍面積及潰瘍抑制率。在靠近潰瘍?cè)罨蛴咸幹車羧∥附M織，以4％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片

5、，HE染色后，在光鏡下觀察潰瘍愈合情況。選取上述石蠟切片，采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)EGF、TGF-β1、VEGF的表達(dá)情況。在靠近潰瘍?cè)罨蛴咸幹車羧∥附M織，放入玻璃勻漿管中，加入等倍體積的預(yù)冷生理鹽水，冰盤上勻漿，采用RT-PCR檢測(cè)EGFmRNA、TGFmRNA、VEGFmRNA的表達(dá)。
　　計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±S）表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)，統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析，然后用LSD法進(jìn)行組間兩兩比較

6、，顯著性差異水平以P＜0.05和P＜0.01為標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠的一般狀態(tài)模型完成后，假手術(shù)組大鼠情況無(wú)明顯變化，其毛發(fā)潤(rùn)澤致密，雙目有神，反應(yīng)靈敏，活動(dòng)量大，進(jìn)食正常，大便呈顆粒狀。其他各組大鼠均出現(xiàn)不同程度的被毛蓬亂，色黃晦暗，萎靡懶動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，食量減少，喜拱背蜷縮，大便發(fā)粘量少。隨著造模結(jié)束后時(shí)間推移和治療給藥的進(jìn)行，各組大鼠上述癥狀逐漸好轉(zhuǎn)，其中模型組好轉(zhuǎn)較慢，各治療組癥狀好轉(zhuǎn)較快，尤以胃高組恢復(fù)

7、最快。
　　2.各組大鼠胃黏膜病理組織形態(tài)的改變
　　2.1 大體形態(tài)觀察假手術(shù)組大鼠胃黏膜呈淡紅色，皺襞明顯，表面未見潰瘍、水腫及充血。模型組大鼠胃黏膜呈凹陷狀潰瘍，邊緣整齊，呈圓形或橢圓形，周圍黏膜環(huán)堤樣水腫隆起，形如火山口，附有白色或黃色炎性滲出物和壞死物，周圍黏膜皺襞消失，呈剝脫狀，有的潰瘍處組織還與周圍組織存在粘連。其他治療組大鼠潰瘍形態(tài)接近模型組，但潰瘍表淺，范圍較小，滲出物和壞死物很少，周圍黏膜無(wú)明顯水腫充血，

8、有的還可見新生皺襞，部分出現(xiàn)愈合瘢痕。
　　2.2 潰瘍面積及潰瘍抑制率比較同模型組相比，胃高、低組和對(duì)照組潰瘍面積均顯著縮小，差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05);同時(shí)分別與對(duì)照組、胃低組相比，胃高組潰瘍面積均顯著縮小，差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);胃高組潰瘍抑制率為62.7％，高于胃低組27.2％和對(duì)照組34.7％。
　　2.3 光學(xué)顯微鏡觀察假手術(shù)組大鼠HE染色胃壁結(jié)構(gòu)正常，黏膜上皮完整，腺體排列

9、規(guī)律，未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組見胃壁結(jié)構(gòu)破壞，黏膜出現(xiàn)壞死、缺損，腺體消失，細(xì)胞排列紊亂，黏膜層有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。其他治療組胃壁結(jié)構(gòu)和黏膜恢復(fù)較好，可見胃壁厚度增加，有新生上皮覆蓋，粘膜下可見肉芽組織，無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。胃高組病理表現(xiàn)趨向正常，與假手術(shù)組相似。
　　3.各組大鼠EGF及EGFmRNA表達(dá)的比較
　　3.1 各組大鼠EGF表達(dá)的比較模型組同假手術(shù)組相比，大鼠EGF表達(dá)平均光度顯著升高，而平均灰度顯著下降，差

10、異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);經(jīng)用藥后，各治療組同模型組相比，平均光度顯著升高，平均灰度顯著下降，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05);各治療組間相比，胃高組比對(duì)照組的平均光度升高明顯，平均灰度下降明顯，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而胃高組較胃低組的平均灰度下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.2 各組大鼠EGFmRNA表達(dá)的比較模型組同假手術(shù)組相比，大鼠EGFmRNA表達(dá)顯著

11、升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);經(jīng)用藥后，各治療組同模型組相比，EGFmRNA表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;各治療組間相比，胃高組EGFmRNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，也顯著高于胃低組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.各組大鼠VEGF及VEGFmRNA表達(dá)的比較
　　4.1 各組大鼠VEGF表達(dá)的比較模型組同假手術(shù)組相比，大鼠VEGF表達(dá)的平均光度顯著升高，

12、而平均灰度顯著下降，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);經(jīng)用藥后，各治療組同模型組相比，平均光度顯著升高，平均灰度顯著下降，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05);各治療組間相比，胃高組比對(duì)照組的平均光度升高明顯，平均灰度下降明顯，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而胃高組較胃低組的平均灰度下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.2 各組大鼠VEGFmRNA表達(dá)的比較模型組同假手術(shù)組相比，大鼠VEGFmR

13、NA表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);經(jīng)用藥后，各治療組同模型組相比，EGFmRNA表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;各治療組間相比，胃高組EGFmRNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，也顯著高于胃低組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　5.各組大鼠TGF-β1及TGF-β1mRNA表達(dá)的比較
　　5.1 各組大鼠TGF-β1表達(dá)的比較模型組同假手術(shù)組相比，大鼠胃黏膜T

14、GF-β1表達(dá)的平均光度顯著升高，而平均灰度顯著下降，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);經(jīng)用藥后，各治療組同模型組相比，平均光度顯著升高，平均灰度顯著下降，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05);各治療組間相比，胃高組比對(duì)照組的平均光度升高明顯，平均灰度下降明顯，差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而胃高組較胃低組的平均灰度下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5.2 各組大鼠TGF-β1mR

15、NA表達(dá)的比較模型組同假手術(shù)組相比，大鼠TGF-β1mRNA表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;經(jīng)用藥后，各治療組同模型組相比，EGFmRNA表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);各治療組間相比，胃高組EGFmRNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，也顯著高于胃低組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1 疏肝健脾法能明顯改善胃潰瘍大鼠病理組織形態(tài)，提高潰瘍抑制率，促