骨折三期治療對SD大鼠骨生長因子表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的 觀察骨折三期治療及一期治療對骨折愈合過程中骨生長因子BMPs,FGF-2及TGF-β<,1>表達(dá)及分布規(guī)律的影響,研究中藥治療對骨折局部FGF-2表達(dá)的干預(yù)作用,從分子水平探討中醫(yī)骨折三期治則對骨折愈合的作用及其機(jī)制,闡明中醫(yī)骨折分期治療的必要性,從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度為中醫(yī)藥治療骨折提供更為科學(xué)的理論根據(jù),指導(dǎo)骨折的治療.材料與方法(1)實(shí)驗(yàn)方劑:實(shí)驗(yàn)所用方劑基于高等中醫(yī)藥院校統(tǒng)編教材《中醫(yī)正骨學(xué)》中的肢傷一方、二方及三方,各經(jīng)加

2、減而成.(2)骨折分期:根據(jù)骨折愈合分期方法與SD大鼠骨折局部組織學(xué)變化,將SD大鼠骨折愈合過程分為三期:早期,即血腫機(jī)化演進(jìn)期;中期,即原始骨痂形成期;后期,即改造塑形期.(3)治療分期:三期治療:按照中藥骨折治療的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行治療,即早期:活血化瘀、行氣止痛,選用加減肢傷一方;中期:接骨續(xù)筋、舒筋活絡(luò),選用加減肢傷二方;后期:補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨,選用加減肢傷三方;一期治療:將骨折愈合的早期、中期與后期合并為一期進(jìn)行治療,將"活血化瘀

3、、行氣止痛、接骨續(xù)筋、舒筋活絡(luò)、補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨"融為一體,選用加減肢傷一方、二方與三方的綜合方.(4)實(shí)驗(yàn)用藥劑量:根據(jù)動物和人用藥劑量換算關(guān)系確定SD大鼠的用藥劑量,以此作為等效劑量,進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察用藥劑量與骨折愈合速度之間的量效反應(yīng)情況,根據(jù)量效反應(yīng)確定實(shí)驗(yàn)最佳用藥劑量為2倍等效劑量.(5)建立骨折模型:于SD大鼠雙脛骨上1/3段前部的中點(diǎn)造成2 mm×1.5mm的缺損,作為骨折愈合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?(6)隨機(jī)分組:168只雄性SD大鼠

4、隨機(jī)取6只作為正常對照組,其余于造模后隨機(jī)平均分為模型對照組、三期治療組和一期治療組,每組再隨機(jī)平均分為9個小組,每小組6只.(7)實(shí)驗(yàn)干預(yù):三期治療組接受三期治療,一期治療組接受一期治療,正常對照組和模型對照組給予相應(yīng)量的生理鹽水.(8)標(biāo)本處理:每組分別于骨折后1、3、5、7、9、12、15、21、28天各處死1小組動物,常規(guī)取材,標(biāo)本常規(guī)固定、脫鈣、包埋、切片.(9)檢測與定量:常規(guī)組織學(xué)檢查,免疫組化S-P法檢測標(biāo)本中的BMPs

5、,FGF-2和TGF-β<,1>,應(yīng)用計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析,對相應(yīng)骨生長因子表達(dá)陽性細(xì)胞進(jìn)行記數(shù)和MOD(Mean Optical Density,平均光密度)測定.結(jié)論〖1〗SD大鼠骨折愈合過程中各時間點(diǎn)BMPs,FGF和TGF-β<,1>表達(dá)的定量變化(MOD或陽性細(xì)胞數(shù))描繪呈一雙峰曲線:大體上由3部分組成:一個基礎(chǔ)水平,兩個高峰.〖2〗中藥治療骨折可以有效地促進(jìn)SD大鼠骨折愈合過程中FGF-2的表達(dá).〖3〗骨折三期治療