神經干細胞移植對大鼠糖尿病性膀胱神經生長因子表達影響的實驗研究.pdf

1、實驗目的：探討神經干細胞移植治療糖尿病大鼠膀胱功能障礙的療效及NGF的表達情況研究。
　　實驗方法：
　　1.采用懸浮法培養(yǎng)、收集NSCs，觀察NSCs原代及傳代細胞的形態(tài)、生長特點，并進行Nestin等免疫化學染色，鑒定是否為神經干細胞。
　　2.將SD大鼠（n=60）隨機選40只進行單次腹腔注射鏈尿佐菌素（60mg/kg）建立糖尿病模型，剩余20只為陰性對照組。根據是否成模將其進一步分為：陽性對照組、NSCs治療組

2、。
　　3.第8周時，NSCs治療組采取膀胱肌肉注射移植NSCs，陽性對照組注射等量的培養(yǎng)液，陰性對照組不做任何處理。4周后，通過尿流動力學檢測膀胱功能；取出膀胱，行 HE染色觀察膀胱逼尿肌形態(tài)學變化；采用免疫組化、Western-blotting檢測膀胱組織中NGF的分布及表達情況。
　　實驗結果：
　　1.用懸浮培養(yǎng)法可得到大小不一、形態(tài)規(guī)則、呈懸浮狀的神經球，經檢測Nestin等抗原染色陽性，為神經干細胞。

3、>　　2.注射STZ3天后大鼠糖尿病成模率達90％，12周血糖穩(wěn)定。尿流動力學發(fā)現，陽性對照組其膀胱容量增大、殘尿量增多、排尿時間間隔延長，經NSCs治療后其殘尿量明顯減少、排尿時間間隔縮短。
　　3.陽性對照組膀胱組織HE染色可見逼尿肌肌束排列紊亂，結構松散，肌束斷裂，肌束間間隙明顯增寬水腫，淋巴細胞浸潤，肌束間膠原纖維減少，小血管充血，肌細胞萎縮明顯病理改變。經NSCs移植治療后，膀胱逼尿肌肌束排列較整齊，結構較緊密，肌束間膠

4、原纖維增多等改變。
　　4.免疫組化檢測結果：陽性對照組NGF的表達區(qū)域較陰性對照組明顯減少，NSCs治療組較陽性對照組明顯增多，NGF的表達區(qū)域主要在膀胱逼尿肌細胞的胞核、胞漿，粘膜也有少量表達。
　　5. Western-blotting測定結果：陽性對照組中NGF表達水平較陰性對照組減少，NSCs治療組中NGF表達水平較陽性對照組明顯增高。
　　結論：
　　1.從胎齡15天的鼠胚胎體的海馬中可成功分離培養(yǎng)出