神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)EAE大鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞增殖及向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的：急性播散性腦脊髓炎(acute disseminated encephalomyelitis，ADEM)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘性疾病。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)是由活化T細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病，被認(rèn)為是ADEM的理想動(dòng)物模型。神經(jīng)干細(xì)胞是一種具有自我更新能力的細(xì)胞，可增殖分化為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的3種基本細(xì)胞：神經(jīng)元細(xì)胞、星形

2、膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。因具有一定的自我更新和分化能力，從而在臨床上有廣闊的應(yīng)用前景。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)作為第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，是神經(jīng)系統(tǒng)最重要的生物活性分子之一，是神經(jīng)系統(tǒng)維持正常發(fā)育和功能的必要因素。NGF能夠促進(jìn)發(fā)育中的感覺神經(jīng)元和交感神經(jīng)元的存活及分化，參與損傷神經(jīng)再生和功能修復(fù)，并且參與維系神經(jīng)、免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)之間的平衡。本實(shí)驗(yàn)通過建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)動(dòng)物

3、模型，給予神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)治療，檢測(cè)NGF對(duì)EAE神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化表達(dá)水平的影響來(lái)探討NGF在EAE時(shí)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖及向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的影響。 方法： 1、選用我院提供的胎齡6～8周的Wistar大鼠為研究對(duì)象，以豚鼠腦脊髓勻漿加完全弗氏佐劑作為抗原，給予Wistar大鼠四足墊皮內(nèi)注射，足背輔以注射百日咳原液，建立EAE模型。 2、對(duì)正常組、免疫后7d組、發(fā)病后3d、7d、14d及21d組，分別進(jìn)行

4、5-溴脫氧尿嘧啶(BrdU)和BrdU/GFAP免疫組織化學(xué)雙染色，以觀察正常大鼠腦內(nèi)BrdU及BrdU/GFAP表達(dá)情況及EAE免疫損傷后BrdU及BrdU/GFAP隨時(shí)間的變化規(guī)律。 3、用NGF藥物治療EAE大鼠，觀察其促神經(jīng)干細(xì)胞增殖效應(yīng)和誘導(dǎo)分化效應(yīng)，用增殖細(xì)胞單克隆抗體BrdtJ及BrdU/GFAP鑒定神經(jīng)干細(xì)胞的自我更新增殖能力及向星形膠質(zhì)細(xì)胞方向分化潛能。 結(jié)果： 1、在免疫后12天開始出現(xiàn)肢體癱瘓，雙后

5、肢拖動(dòng)等EAE臨床癥狀。光鏡下可見腦組織中有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，炎性細(xì)胞聚集在血管周圍呈典型的“袖套"樣改變。 2、在正常組大鼠，Brdu陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在室管膜下區(qū)(SVZ)及海馬齒狀回的顆粒層(SGZ)；Brdu陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在免疫后呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì)，于發(fā)病后3d達(dá)高峰，21d恢復(fù)正常。與EAE組比較，治療組BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增強(qiáng)，治療組與EAE組之間在發(fā)病后7d、14d和21d均存在顯著性差異。 3、EA

6、E造模后，BrdtJ+7GFAP+在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)不同，BrdU+/GFAP+細(xì)胞在免疫后呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì)，于發(fā)病后3d達(dá)高峰，持續(xù)一周后緩慢下降，21d仍高于正常。治療組BrdU+/GFAP+細(xì)胞數(shù)量明顯增多，治療組與EAE組之間在發(fā)病后7d、14d和21d均存在顯著性差異，治療組發(fā)病后7d與14d相比無(wú)顯著性差異。 結(jié)論： 1、EAE模型建立方法穩(wěn)定、可靠。 2、EAE可以誘導(dǎo)大鼠腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的