淫羊藿苷對大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：觀察淫羊藿苷（icariin，ICA）對體外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：采用原代培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞，并測定其增殖。于第3天分別給予不同濃度的ICA（50、100、200μM）孵育12 h后，使用5-溴脫氧尿嘧啶核苷（BrdU）標(biāo)記分裂增殖的細(xì)胞，于第7天收集細(xì)胞待測。首先，采用免疫熒光法檢測神經(jīng)干細(xì)胞巢蛋白（Nestin）的表達(dá)；BrdU免疫熒光法檢測神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力

2、；形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)手段檢測神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞；其次，細(xì)胞計數(shù)儀檢測神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)目；BrdU免疫熒光檢測ICA對神經(jīng)干細(xì)胞的增殖情況；最后，實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time RT-PCR）檢測細(xì)胞周期基因Cyclin D1和p21 mRNA的表達(dá)；Western Blot檢測Cyclin D1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定：（1）形態(tài)學(xué)觀察：體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)干細(xì)胞懸浮聚集生長，呈不規(guī)則的

3、圓形或桑葚狀細(xì)胞集落，球體透亮，邊緣清晰、有荊棘狀突起，立體感強(qiáng)；（2）神經(jīng)干細(xì)胞巢蛋白（Nestin）表達(dá)陽性；（3）神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力（BrdU）表達(dá)陽性；（4）神經(jīng)干細(xì)胞分化能力：神經(jīng)元（NSE）表達(dá)陽性和星型膠質(zhì)細(xì)胞（GFAP）表達(dá)陽性；2.ICA明顯增加神經(jīng)干細(xì)胞的個數(shù)；3.ICA促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)BrdU陽性的表達(dá)；4.ICA明顯增高神經(jīng)干細(xì)胞Cyclin D1和p21 mRNA的表達(dá)；5.ICA明顯增高神經(jīng)干細(xì)胞Cyclin