Calpain在異氟烷對大鼠海馬神經(jīng)干細胞增殖與分化影響中的作用.pdf

1、【目的】研究異氟烷對神經(jīng)干細胞（NSCs）增殖與分化的毒性作用，探討Calpain及其下游相關信號通路在異氟烷對NSCs影響中的作用，為預防和治療全身麻醉藥對發(fā)育期大腦神經(jīng)毒性作用提供一定理論依據(jù)。
　　【方法】
　　1.原代提取和培養(yǎng)SD大鼠新生鼠（出生1 d內）海馬NSCs，取傳代至第2代細胞進行后續(xù)試驗。
　　2. NSCs誘導分化培養(yǎng)，取傳代NSCs置于誘導分化培養(yǎng)基內培養(yǎng)，7～9d分化完成。
　　3.實

2、驗分組及藥物處理，實驗隨機分為4組（n=5），包括空白對照組（CON control）：給予含有21％O2和5%CO2的混合氣體，處理6h；異氟烷組（ISO）：給予3.4％異氟烷，處理6h；calpeptin組(CP)：于麻醉前30分鐘于培養(yǎng)基中加入10μM calpeptin，并給予含有21％O2和5%CO2的混合氣體，處理6h；異氟烷+calpeptin組(ISO+CP)：于麻醉前30分鐘于培養(yǎng)基中加入10μM calpeptin，

3、給予3.4%異氟烷，處理6h。
　　4.乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒檢測NSCs乳酸釋放量。
　　5. TUNEL試劑盒檢測NSCs凋亡。
　　6. BrdU檢測NSCs增殖。
　　7. Western blot檢測GFAP、Tuj-1、αII-spectrin及其裂解產(chǎn)物SBDP145、CDK5、p35、p25蛋白水平變化。
　　【結果】
　　1. NSCs呈懸浮生長，約3d左右形成神經(jīng)球，傳代后行免

4、疫熒光化學染色檢測NSCs標志物nestin，第二代NSCs陽性率為（94.24±3.99）%。
　　2.與CON組相比，ISO組LDH釋放量在麻醉后0h、12h、24h都增高，差異有統(tǒng)計學意義；而ISO組在麻醉后各時間點的TUNEL陽性細胞數(shù)目并不顯著增多。
　　3.與CON組相比較，ISO組在麻醉后0h、12h、24h時BrdU標記的NSCs的數(shù)目明顯減少。
　　4.與CON組相比較，ISO組在麻醉后0h和12h，

5、SBDP145水平明顯升高（P<0.01)，24h時無明顯改變。
　　5.與CON組相比較，CP組SBPD145水平降低，與ISO組相比，ISO+CP組SBPD145水平明顯下降。
　　6.與CON組相比，ISO組BrdU陽性細胞數(shù)目顯著減少，而CP組無明顯差異；與ISO組相比，ISO+CP組BrdU陽性細胞數(shù)目增加。
　　7.與CON組相比，ISO組GFAP水平升高，Tuj-1水平無明顯改變；CP組GFAP水平無明顯

6、改變，而Tuj-1水平升高。與ISO組相比較，ISO+CP組GFAP水平降低，Tuj-1水平無明顯改變。
　　8.與CON組相比，ISO組在麻醉后0h、12h、24h CDK5和p25表達水平增高，而p35水平下降，其差異均有統(tǒng)計學意義。與CON組相比，CP組p35表達水平增高，而p25、CDK5表達水平無明顯變化；與ISO組相比，ISO+CP組p35表達水平增高而p25、CDK5表達水平降低。
　　【結論】異氟烷可導致NS