PPARα-PPARβ在神經(jīng)干細胞增殖、分化中的表達.pdf

1、研究背景: 神經(jīng)干細胞(neural stem cells,NSCs)是指具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞的能力，能自我更新并能提供大量腦組織細胞的細胞群。神經(jīng)干細胞具有以下兩個基本特性：自我復制能力；多向分化潛能。神經(jīng)干細胞不僅能促進神經(jīng)元的再生和腦組織的修復，而且通過基因修飾還可用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因治療，表達外源性的神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)營養(yǎng)因子及代謝性酶，為許多難以治療的神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供了新的治療途徑。雖然這類細胞終

2、身存在，但由于絕對數(shù)量和局部微環(huán)境的限制，使損傷神經(jīng)組織自我修復作用微乎其微。采用外源性的神經(jīng)干細胞移植己被認為是治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病最具前景的治療方法之一。 過氧化物酶體增殖劑激活受體(peroxisome proliferation-activated receptors，PPARs)具有多種生物效應，可促進脂肪細胞分化和脂肪生成，增強機體對胰島素的敏感性，調(diào)解體內(nèi)糖平衡，抑制炎癥因子生成及炎癥反應，影響腫瘤生長，對心血管產(chǎn)生保

3、護效應。近年來的研究表明，PPARs還具有神經(jīng)保護作用，可以減輕阿爾采末病、帕金森病、腦缺血及多發(fā)性硬化等神經(jīng)退行性疾病中神經(jīng)細胞的損傷。因此，PPARs的研究將極有可能為這些疾病的治療另辟蹊徑。 方法: 本研究采用無血清培養(yǎng)液，給予生長因子bFGF和EGF，利用神經(jīng)干細胞具有自我更新和增殖能力的特性，從新生大鼠的大腦皮層、室管膜下區(qū)和海馬等部位分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞。采用細胞免疫熒光標記法、western blot和RT-

4、PCR分別檢測PPARα/PPARβ蛋白或mRNA在神經(jīng)干細胞不同階段的表達水平。 結(jié)果: 1.免疫熒光定位顯示，PPARα/PPARβ蛋白被染成綠色，在神經(jīng)干細胞上均可見。熒光主要位于細胞核內(nèi)，細胞質(zhì)中也有少許，說明它們均主要在細胞核內(nèi)表達。 2.Western blot示，經(jīng)PPARα/PPARβ抗體分別孵育后出現(xiàn)的強陽性蛋白印跡條帶也證實了PPARα/PPARβ在神經(jīng)干細胞上的表達。并且隨誘導分化時間延長，

5、PPARβ表達量逐漸降低，蛋白條帶變淺；而PPARα表達量變化不明顯。 3.RT-PCR示，在未分化及已分化的神經(jīng)干細胞中均存在有PPARα和PPARβ的mRNA。同western blot結(jié)果的趨勢一致，PPARβ在神經(jīng)干細胞分化后顯著減少；而PPARα mRNA在神經(jīng)干細胞分化的過程中變化不大。 結(jié)論: 神經(jīng)干細胞是能自我更新和具有多種潛能的母系神經(jīng)細胞。它的成功分離和體外培養(yǎng)對通過細胞移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾