內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化及Notch信號(hào)分子表達(dá)的影響.pdf

1、南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化及Notch信號(hào)分子表達(dá)的影響姓名：魯友明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（神經(jīng)外科）指導(dǎo)教師：鄧志鋒20080601摘要1貼壁篩選法分離培養(yǎng)大鼠EPCs，形態(tài)學(xué)、免疫細(xì)胞染色法檢測(cè)Vlll因子、FLK1、CDl33、CD34的表達(dá)及RT—PcR檢測(cè)eNOS、Vlll因子、FLK1、CDl33、Tie一2、CD34的基因表達(dá)鑒定EPCs。2神經(jīng)球懸浮法培養(yǎng)小鼠NSCs，免疫細(xì)胞染色法

2、檢測(cè)nestin的表達(dá)以鑒定NSCs。3建立transwell共培養(yǎng)體系，實(shí)驗(yàn)共分為5組：(DEPCs與NSCs共培養(yǎng)組(EPcsNSCs)：實(shí)驗(yàn)所用EFCs為原代，NSCs為第3代，共培養(yǎng)時(shí)，transwell上層皿為EPCs，下層皿為NSCs；(至)EPCs與經(jīng)SU5416處理后的NSCs共培養(yǎng)組[EPCs(SU5416NSCs)]：transwell下層皿的NSCs經(jīng)SU5416(10州)作用6h后再與上層皿的EPCs共培養(yǎng)；(蠶

3、)EPCs與經(jīng)DAPT處理后的NSCs共培養(yǎng)組[EPCs(DAPTNSCs)]：transwel1上層皿為EPCs，下層皿為已經(jīng)DAPT(10州)作用6h后的NSCs；④經(jīng)DAPT處理后的NSCs對(duì)照組(DAPTNSCs)：transwell上層皿為混合培養(yǎng)培養(yǎng)基，下層皿為已經(jīng)DAPT(10州)作用6h后的NSCs；⑤單純NSCs對(duì)照組(NSCs)：transwell上層皿為混合培養(yǎng)培養(yǎng)基，下層皿為NSCs。4采用RTPCR方法觀察各培

4、養(yǎng)組共培養(yǎng)2h、6h、12h后notch信號(hào)通路相關(guān)基因notchl、Hesl、mashl以及NSCs增殖分化相關(guān)基因ki67、神經(jīng)巢蛋白(nestin)、B一微管蛋白(BTubulin)、神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白(GFAP)的基因表達(dá)的變化。結(jié)果：1EFCs呈典型的“鵝卵石一排列生長(zhǎng)，并經(jīng)細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示Vlll因子、CD34、FL卜l和CDl33陽(yáng)性，RT—PcR檢測(cè)有eNOS、Vlll因子、cD34、FLK—l、CDl33和Tie2的

5、基因表達(dá)，符合EPCs特征。2成球懸浮法培養(yǎng)的小鼠NSCs增殖旺盛，nestin呈陽(yáng)性表達(dá)。3各共培養(yǎng)組NSCs增殖分化相關(guān)基因及notch信號(hào)通路相關(guān)基因的變化：(1)EPCs可促進(jìn)NSCs的ki67及nestin基因表達(dá)。(EPcsNSCs)組與[EPCs(SU5416NSCs)]組比較，ki67及nestin基因表達(dá)明顯上調(diào)，說(shuō)明EPCs可以促進(jìn)NSCs的ki67、nestin基因表達(dá)且與EPCs分泌的內(nèi)皮生長(zhǎng)因子有關(guān)。(2)EP