雜合性缺失及相關(guān)抑癌基因表達(dá)在胃腸道間質(zhì)瘤中的作用研究.pdf

1、目的：研究胃腸道間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)染色體9p21區(qū)域雜合性缺失(loss of heterozygosity，LOH)及相關(guān)抑癌基因的表達(dá)，探討它們與該腫瘤臨床病理特征和預(yù)后因素之間的關(guān)系，以期尋找新的判斷GIST生物學(xué)行為的指標(biāo)。 方法：(1)收集我院1999—2007年收治的181例胃腸道間質(zhì)瘤病例。分析其臨床病理及隨訪資料，包括癥狀和體征、影像學(xué)檢查、病理形態(tài)、

2、免疫組化表現(xiàn)、手術(shù)治療方案及生存狀態(tài)，根據(jù)Fletcher推薦的生物學(xué)行為分級法進(jìn)行分組，比較不同因素對生存率的影響并進(jìn)行預(yù)后分析。(2)采用微衛(wèi)星分析方法，檢測51例GIST標(biāo)本中染色體9P21區(qū)域D9S1751、D9S1846、D9S942和D9S1748四個微衛(wèi)星位點的LOH現(xiàn)象，并且復(fù)習(xí)總結(jié)GIST的臨床病理及隨訪資料，分析9P21區(qū)域LOH現(xiàn)象與GIST生物學(xué)行為的相互關(guān)系。(3)在已行LOH分析的51例GIST標(biāo)本中，采用免

3、疫組化技術(shù)，對發(fā)生高頻LOH的D9S942位點相鄰的CDKN2A抑癌基因，檢測其產(chǎn)物p16蛋白的表達(dá)，分析p16蛋白的異常表達(dá)與GIST臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)果：(1)本組GIST患者的病變部位：胃107例(59.1％)，小腸51例(28.2％)，結(jié)直腸等其他部位23例(12.7％)；伴有肝轉(zhuǎn)移7例。172例(95.0％)術(shù)前通過影像學(xué)檢查明確病灶部位，其中胃鏡53.5％(92/172)，CT34.3％(59/172)，

4、內(nèi)鏡超聲和膠囊內(nèi)鏡17.4％(30/172)。免疫組化檢測顯示CD117陽性171例(94.5％)，CD34陽性156例(86.2％)。依據(jù)Fletcher分級分為極低度惡性風(fēng)險15例(8.3％)、低度惡性風(fēng)險48例(26.5％)、中度惡性風(fēng)險52例(28.7％)和高度惡性風(fēng)險66例(36.5％)。176例(97％)患者經(jīng)手術(shù)完整切除，其中26例(14％)行多臟器聯(lián)合切除?；颊?、3、5年生存率分別為95.2％、87.9％和78.5％。

5、單因素分析顯示：年齡、腫瘤大小、發(fā)病部位、核分裂像數(shù)目、Fletcher分級以及是否合并聯(lián)合臟器切除對生存率有影響(P<0.05)；多因素分析顯示Fletcher分級和腫瘤大小是影響患者預(yù)后的重要因素。術(shù)后有8例高?；颊吆?例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者服用伊馬替尼后病情穩(wěn)定。(2)51例GIST標(biāo)本9P21區(qū)域LOH率分別為D9S175137.0％(10/27)、D9S184637.5％(12/32)、D9S94242.1％(16/38)和D9S17

6、4824.2％(8/33)，平均雜合性缺失率為35.2％。LOH表達(dá)在性別、年齡、發(fā)病部位和腫瘤大小方面無差別。隨著腫瘤侵襲風(fēng)險程度的增加，LOH率逐漸增高，在LOH率最高的D9S942位點，高度與非高度惡性風(fēng)險組的LOH率有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。高度惡性風(fēng)險組至少有一個位點發(fā)生LOH的占90％(18/20)，高于中度惡性組的57.1％(8/14)和低度&極低度惡性組的33.3％(5/15)(P<0.05)。發(fā)生LOH的患者死亡率

7、為25.8％(8/31)，而無LOH的患者死亡率為5.6％(1/18)。(3)發(fā)生高頻LOH的D9S942位點相鄰的CDKN2A抑癌基因，其產(chǎn)物p16蛋白在GIST患者中的陰性表達(dá)率為41.2％(21/51)，陽性率為58.8％(30/51)。p16表達(dá)在GIST患者的性別、年齡、腫瘤大小、Fletcher分級和發(fā)病部位方面無統(tǒng)計學(xué)差異，僅與核分裂像數(shù)目有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。高度惡性風(fēng)險組p16陰性表達(dá)率為60％(12/20)，

8、明顯高于中度惡性組的35.7％(5/14)和低度&極低度惡性組的23.5％(4/17)，而且高度與低度&極低度惡性組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。p16陰性表達(dá)組1、3、5年生存率分別為100％、84.8％和70，8％，p16陽性表達(dá)組1、3、5年生存率分別為100％、100％和92.0％，兩組生存率差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：(1)內(nèi)鏡和CT是GIST有效的主要診斷手段，CD117是GIST確診的重要標(biāo)記

9、物。Fletcher分級法對預(yù)后評估有重要意義。外科手術(shù)仍是目前GIST的主要治療方法，而分子靶向治療是改善GIST預(yù)后的重要手段。(2)不同F(xiàn)letcher分級的GIST中都有染色體9P21區(qū)域的雜合性缺失現(xiàn)象，以高度惡性侵襲行為的腫瘤中最高，提示LOH這一特征性細(xì)胞遺傳學(xué)改變可能與GIST的惡性生物學(xué)行為有關(guān)。(3)發(fā)生高頻率雜合性缺失的D9S942位點附近存在著重要的CDKN2A抑癌基因，其產(chǎn)物p16蛋白在GIST中隨著惡性行為的