苦瓜不同提取物對(duì)STZ誘導(dǎo)Ⅱ型糖尿病小鼠降血糖的作用研究.pdf

1、目的:研究探討苦瓜不同濃度的甲醇提取物對(duì)于由鏈脲佐菌素(streptozotocin STZ)誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病小白鼠降血脂以及其降血糖的作用，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定出苦瓜不同濃度甲醇提取物的主要活性部位，初步來(lái)研究其降血糖的作用機(jī)制，為研究苦瓜的藥理藥效以及其臨床運(yùn)用提供了科學(xué)的理論依據(jù)。
　　方法:連續(xù)4周給實(shí)驗(yàn)雄性昆明小白鼠喂養(yǎng)自制高脂飼料（10％蛋黃、10％豬油、1％膽固醇、0.2％膽鹽、78.8％基料），目的為構(gòu)造高血脂癥小鼠模型

2、，而后再建立Ⅱ型糖尿病的小鼠模型通過(guò)小鼠腹腔一次性注射一定劑量的鏈脲佐菌素(STZ)。實(shí)驗(yàn)首先將新鮮苦瓜切塊去掉種子，25kg切塊的苦瓜加入30L雙蒸水水煮3次每次3小時(shí)，用已經(jīng)消毒過(guò)的紗布過(guò)濾每次煎煮的提取液，提取液經(jīng)過(guò)濾紙抽濾后合并濾液，將其減壓濃縮成為清膏，然后濃縮醇沉，加入95％的乙醇濃度調(diào)至65％，將其放置設(shè)置為4℃冰箱24小時(shí)，清膏經(jīng)過(guò)濾紙減壓抽濾后得到濾液以及醇沉的濾渣。將所得濾液合并經(jīng)過(guò)減壓濃縮，然后再冷凍干燥得苦瓜水煮

3、醇沉組分。
　　將水煮醇沉后得到的組分依次分別用雙蒸水、20％甲醇、40％甲醇、60％甲醇、80％甲醇和100％甲醇經(jīng)過(guò)大孔樹脂洗脫分離得到不同濃度的組分。再將得到的不同濃度組分分別減壓濃縮，冷凍干燥后得不同濃度組分的干燥物。實(shí)驗(yàn)因?yàn)?00％甲醇部位所得的組分太少故將其與80％甲醇部位的組分合并。將經(jīng)過(guò)STZ腹腔注射已經(jīng)造模成功的Ⅱ型糖尿病的小鼠隨機(jī)分組為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組（二甲雙胍陽(yáng)性組）、水部位組、20％甲醇部位組、40％

4、甲醇部位組、60％甲醇部位組、高濃度甲醇部位合并組，設(shè)立正常對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。正常對(duì)照組以及模型對(duì)照組分別給予連續(xù)灌胃4周的生理鹽水，水部位組、20％甲醇部位組、40％甲醇部位組、60％甲醇部位組以及高濃度甲醇部位合并組分別給予連續(xù)4周灌胃相應(yīng)的相同劑量的提取分離物。
　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以小鼠平均體重、脾臟重量、肝臟重量、胰腺重量、腎臟重量這些解剖生理指標(biāo)，血清總膽固醇水平(TC)、血清甘油三酯水平(TG)、血清血糖濃度水平(GLU

5、)、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平(ALT)、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平(AST)以及糖耐量作為為生物化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，以上指標(biāo)測(cè)定均以試劑盒的操作規(guī)定嚴(yán)格按照生物化學(xué)分析方法來(lái)測(cè)定。
　　根據(jù)已測(cè)定的相關(guān)生化指標(biāo)確定了苦瓜不同提取物的活性部位，同時(shí)結(jié)合分子生物學(xué)測(cè)定了相關(guān)基因的變化，包括CYP7A1（膽固醇7a-羥化酶）、G6pc（葡萄糖6磷酸酶）和Gck（葡萄糖激酶）。以上指標(biāo)測(cè)定均以試劑盒的操作規(guī)定嚴(yán)格按照分子生物學(xué)PCR技術(shù)來(lái)檢測(cè)活性部位組小鼠相

6、關(guān)指標(biāo)進(jìn)行降糖降脂作用的研究。
　　結(jié)果:
　　1.將由鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)造模成功的Ⅱ型糖尿病小白鼠給予苦瓜不同濃度甲醇提取物灌胃后其糖尿病的三多一少的癥狀、體重以及其精神狀態(tài)方面均有較好的改善作用。
　　2.由鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病小白鼠給予灌胃苦瓜不同濃度甲醇提取物能夠明顯降低實(shí)驗(yàn)小鼠的血糖值，能夠很好的改善其糖耐量，并且能夠很好的調(diào)節(jié)血清中總膽固醇水平(TC)以及血清中甘油三酯水平(TG)，而

7、且顯著的升高了實(shí)驗(yàn)型Ⅱ型糖尿病小白鼠的血清高密度脂蛋白的水平高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。其中，水部位組分的苦瓜不同濃度甲醇提取物的作用最強(qiáng)。
　　3.苦瓜的水部位組分能夠明顯降低由鏈脲佐菌素造模成功的Ⅱ型糖尿病小白鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平(ALT)以及血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平(AST)。
　　4.病理學(xué)檢查顯示，經(jīng)過(guò)苦瓜不同濃度甲醇提取物灌胃治療后，糖尿病小鼠肝細(xì)胞損傷減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，其中水部位的療效最佳。
　　

8、5.苦瓜水部位組分能夠顯著地降低實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠G6pc的相對(duì)表達(dá)并能顯著地升高GCK和CYP7A1的相對(duì)表達(dá)，促進(jìn)了Ⅱ型糖尿病實(shí)驗(yàn)小鼠的糖脂代謝。
　　結(jié)論:
　　由鏈脲佐菌素造模成功的Ⅱ型糖尿病小白鼠給予灌胃苦瓜不同濃度甲醇提取物后其血糖水平都有一定的降低效用，同時(shí)提取物能夠很好的改善實(shí)驗(yàn)小鼠的脂質(zhì)代謝紊亂以及發(fā)揮肝臟的保護(hù)作用，為防治糖尿病以及其并發(fā)癥的產(chǎn)生和發(fā)展發(fā)揮了很好的效用，實(shí)驗(yàn)確定了苦瓜不同濃度甲醇提取物降糖降