RhoB在腎透明細胞癌中的表達和臨床意義及對腎癌細胞增殖、周期和凋亡的影響.pdf

1、目的:Rho家族(RhoA、RhoB、RhoC)屬于小G蛋白家族,是一組相對分子量約20-25kD的GTP結(jié)合蛋白,在細胞的信號轉(zhuǎn)導通路中發(fā)揮重要作用,并影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。RhoB是Rho亞家族中一個較為獨特的分子,雖然與同家族的RhoA、RhoC具有高度的同源性,但在不同組織和細胞中其表達定位和功能等方面存在明顯不同,目前研究顯示RhoB在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮抑癌基因作用。腎癌是我國泌尿系統(tǒng)最常見的腫瘤之一,占全身惡性腫瘤的2％-

2、3%,主要起源于腎小管上皮細胞,其中60%-80%為腎透明細胞癌(ccRCC)。對于局限性腎透明細胞癌,手術(shù)切除是主要的治療方法,對傳統(tǒng)的放化療不敏感,于是我們希望通過研究RhoB在腎透明細胞癌中的表達及對腎透明細胞癌的生物學功能研究,探索新的腫瘤治療途徑。
　　方法:(1)通過蛋白免疫印跡(westernblot)方法檢測16例腎透明細胞癌及其對應(yīng)的癌旁組織和3株腎癌細胞株(786-O,769-P,Caki-1)及其正常腎小管上

3、皮細胞株(HKC)中RhoB的蛋白表達水平,并進一步通過免疫組化SP法檢測80例腎透明細胞癌石蠟標本及10對腎透明細胞癌和對應(yīng)癌旁正常組織石蠟標本中RhoB的表達,并結(jié)合病人臨床病理特征進行統(tǒng)計學分析。(2)構(gòu)建pcDNA3.0-Flag-RhoB真核表達載體,并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)入腎癌細胞786-O和Caki-1中,用MTS法、細胞平板克隆試驗和流式細胞儀檢測過表達RhoB對腎癌細胞增殖、細胞周期和細胞凋亡效應(yīng)的影響。
　　

4、結(jié)果:(1)RhoB在ccRCC組織和腎癌細胞株中表達水平明顯低于相應(yīng)的癌旁組織及正常腎小管上皮細胞株(HKC)(P值均<0.001),免疫組化結(jié)果顯示RhoB的低表達水平與患者的腫瘤大小(P<0.001)、TNM分級(P=0.006)存在顯著相關(guān)性,與患者年齡、性別無相關(guān)性(P>0.05)。(2)過表達RhoB顯著抑制腎癌細胞786-O和Caki-1的細胞增殖,誘導細胞周期G2/M阻滯,促進細胞凋亡。
　　結(jié)論:RhoB在腎透明