祛瘀解毒法對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者及大鼠卵丘顆粒細(xì)胞凋亡與分泌影響的研究.pdf

1、目的： 觀察祛瘀解毒法結(jié)合IVF-ET治療血瘀蘊(yùn)毒型子宮內(nèi)膜異位癥不孕的療效，并觀察其對(duì)卵丘顆粒細(xì)胞凋亡及分泌功能的影響，探討其作用機(jī)理，試圖開辟中西醫(yī)結(jié)合治療EM不孕的新思路，為臨床有效治療該病提供依據(jù)。 方法： 臨床研究：將在行IVF治療前經(jīng)腹腔鏡、剖腹探查或超聲診斷為EM患者82例隨機(jī)分為治療組42例和觀察組40例。治療組42例口服祛瘀解毒顆粒3個(gè)月后行IVF-ET長(zhǎng)方案治療；觀察組40例EM患者直接行IV

2、F-ET長(zhǎng)方案治療。觀察治療前后血瘀蘊(yùn)毒證候積分變化、臨床妊娠率、血清和卵泡液E2、P含量、卵丘顆粒細(xì)胞調(diào)亡率及顆粒細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)情況。同時(shí)行卵丘顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)48h后觀察E2、P的分泌情況以了解卵丘顆粒細(xì)胞的分泌功能。 實(shí)驗(yàn)研究一：40例EM模型大鼠隨機(jī)分為試驗(yàn)組、觀察組各20例，另取20只大鼠只牽拉子宮作為空白組。試驗(yàn)組每天給予祛瘀解毒顆粒溶于2ml生理鹽水灌胃，觀察組和空白組均給予2ml生理鹽水，連續(xù)

3、灌胃3周。末次給藥后24h各組大鼠均給予人絕經(jīng)后促性腺激素（HMG）50IU腹腔注射，48h后給予人絨毛膜促性腺激素（HCG）100IU/100g，14～16h后處死大鼠收集卵細(xì)胞及顆粒細(xì)胞團(tuán)，觀察優(yōu)質(zhì)卵細(xì)胞數(shù)目及優(yōu)質(zhì)卵細(xì)胞率，采用PI法檢測(cè)卵丘顆粒細(xì)胞調(diào)亡率，觀察顆粒細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白Bax與Bcl-2的表達(dá)情況。 實(shí)驗(yàn)研究二：分別將三組大鼠卵丘顆粒細(xì)胞懸液用0.4%的臺(tái)盼藍(lán)染色，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞存活數(shù)大于90%

4、后入選。用M199培養(yǎng)液（含20%小牛血清、100 U/ml青霉素和100 mg/ml鏈霉素）將入選顆粒細(xì)胞懸液調(diào)整為3×106/ml的單細(xì)胞懸液備用。將顆粒細(xì)胞懸液按3×106/孔，隨機(jī)種入事先用0.05%L-多聚賴氨酸涂布的多孔培養(yǎng)板內(nèi)，放入充5%CO2和95%空氣的37℃恒溫孵箱中預(yù)培養(yǎng)24h。倒置顯微鏡下觀察顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)情況。細(xì)胞貼壁后換入含2%小牛血清、100U/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素的M199培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24

5、h、48h后收集培養(yǎng)液，-20℃凍存，測(cè)E2、P。 結(jié)論： 祛瘀解毒顆粒是經(jīng)臨床實(shí)踐篩選出的治療子宮內(nèi)膜異位癥的有效中藥，具有祛瘀解毒、通絡(luò)止痛之效。本課題以該方與現(xiàn)代輔助生殖技術(shù)相結(jié)合，采用現(xiàn)代生殖醫(yī)學(xué)的相關(guān)觀察指標(biāo)，由細(xì)胞因子角度，從臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩個(gè)方面，對(duì)祛瘀解毒顆粒治療子宮內(nèi)膜異位癥不孕的臨床療效及作用機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)探討，認(rèn)為血瘀蘊(yùn)毒是子宮內(nèi)膜異位癥的主要病機(jī)之一，祛瘀解毒顆粒是治療血瘀蘊(yùn)毒型子宮內(nèi)膜異位癥

6、的有效方藥。 臨床研究結(jié)果表明，祛瘀解毒顆?？梢愿纳蒲鎏N(yùn)毒癥候，提高子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者臨床妊娠率，探討其作用機(jī)理可能與通過改善內(nèi)分泌，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，降低顆粒細(xì)胞調(diào)亡率等有關(guān)。此外，臨床研究及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明祛瘀解毒顆?？梢越档吐亚痤w粒細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)、增加Bcl-2蛋白表達(dá)，使Bcl-2/Bax比值升高，體外培養(yǎng)48h, 72h后E2和P分泌增加，通過降低卵丘顆粒細(xì)胞凋亡，提高卵細(xì)胞質(zhì)量，改善內(nèi)分泌失調(diào)，從而提高EM患