組織工程骺板軟骨修復(fù)幼兔骺板損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、骺板損傷后骨橋形成是引起兒童肢體短縮及成角畸形的常見(jiàn)原因之一，現(xiàn)有的治療方法主要是骨橋切除后植入脂肪等填充物，不同程度地恢復(fù)受累肢體的縱向生長(zhǎng)能力及矯正部分成角畸形。這些治療方法不滿意的主要原因可能是填充物僅能通過(guò)機(jī)械阻隔作用，防止骨橋形成，不具備生長(zhǎng)能力．因此，尋找具有生長(zhǎng)能力的填充物成為研究重點(diǎn)之一。近年來(lái)組織工程技術(shù)快速發(fā)展，組織工程骺板軟骨的構(gòu)建已初步顯示出近期效果，本研究試圖通過(guò)構(gòu)建天然骺板軟骨獲得遠(yuǎn)期療效。 目的：通

2、過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，觀察比較不同部位骺板軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)特性，確定生長(zhǎng)潛力最大的取材部位；以牛關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)(cattlearticular cartilage extracellular matrix CACECM)為支架，復(fù)合同種異體骺板軟骨細(xì)胞體外構(gòu)建組織工程骺板軟骨；將組織工程骺板軟骨植入幼兔股骨遠(yuǎn)端的骺板缺損區(qū)，觀察其是否可以有效地防止骨橋形成。 方法： (1)體外分離培養(yǎng)骺板軟骨細(xì)胞，通過(guò)大體及組織學(xué)觀察細(xì)

3、胞生長(zhǎng)特性；通過(guò)生長(zhǎng)曲線等比較不同部位骺板軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)潛力。 (2)CACECM復(fù)合骺板軟骨細(xì)胞后，光鏡、電鏡、染色等方面觀察細(xì)胞在CACECM上的生長(zhǎng)情況，確定CACECM對(duì)骺板軟骨細(xì)胞的影響；體內(nèi)異位植入CACECM，不同的時(shí)間取出，大體及染色情況下觀察CACECM自行降解時(shí)間、局部反應(yīng)等；復(fù)合物植入兔背部肌肉中，不同的時(shí)間取出組織塊觀察是否異位成軟骨、降解時(shí)間、排異反應(yīng)等。 (3)將復(fù)合骺板細(xì)胞的CACECM體外培

4、養(yǎng)后植入幼兔股骨遠(yuǎn)端骺板缺損區(qū)，不同的時(shí)間點(diǎn)觀察股骨生長(zhǎng)及畸形發(fā)生情況。 結(jié)果： (1)2周齡兔股骨遠(yuǎn)端及脛骨近端的骺板軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)特性及單位體積細(xì)胞產(chǎn)量等方面優(yōu)于髂骨、肱骨遠(yuǎn)端及尺橈骨近端的骺板細(xì)胞，可優(yōu)先作為骺板組織工程的種子細(xì)胞；骺板軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)不要超過(guò)三代，以保持良好的生長(zhǎng)潛力。 (2)CACECM組織相容性較好；骺板軟骨細(xì)胞可以在CACECM支架上不斷增殖生長(zhǎng)，分泌基質(zhì)；CACECM可以在體內(nèi)不斷降

5、解，不存在明顯的排異反應(yīng)及組織殘留；CACECM復(fù)合骺板軟骨細(xì)胞在體外可以繼續(xù)生長(zhǎng)，體內(nèi)可形成類軟骨樣組織、分泌糖胺聚糖(glycosaminoglycans，GAG)及Ⅱ型膠原。 (3)以CACECM作為支架的組織工程骺板軟骨在4周、8周、12周及16周均能有效地防止股骨成角和短縮畸形，而單獨(dú)植入CACECM則不能阻止其畸形的發(fā)生。 本文證明異體組織工程骺板軟骨在骺板早閉的治療中，預(yù)防骨橋形成及促進(jìn)損傷骺板生長(zhǎng)是有作用