組織工程骺板的構(gòu)建及其治療骺板損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、骺板組織工程種子細(xì)胞——兔骺板軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)及其細(xì)胞表型的研究 目的:探索體外培養(yǎng)兔骺板軟骨細(xì)胞的方法，并對(duì)其細(xì)胞表型進(jìn)行初步研究，為骺板組織工程尋找良好的種子細(xì)胞。 方法:取兩周齡，體重250g左右幼兔脛骨上端骺板，經(jīng)過(guò)機(jī)械剪切、胰酶、膠原酶的消化獲得細(xì)胞后，1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。 應(yīng)用倒置顯微鏡、透射電鏡、Alcian blue染色、蕃紅花“O”——亮綠染色，免疫組織化學(xué)染色、PCR、MTT等方法，對(duì)

2、細(xì)胞進(jìn)行定性、定量檢測(cè)。 結(jié)果:在體外觀察到了骺板軟骨細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)及傳代的生長(zhǎng)過(guò)程，多次傳代后增殖能力降低。PCR檢測(cè)有Ⅱ型膠原的表達(dá)、蕃紅花“O”——亮綠染色陽(yáng)性、Alcian blue染色顯示第三代細(xì)胞蛋白聚糖含量高，MTT顯示第三代細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈倒“S”型，于第12天出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制。 結(jié)論:成功地建立了骺板軟骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法，并證實(shí)所培養(yǎng)出的細(xì)胞是骺板軟骨細(xì)胞。 二、組織工程骺板的構(gòu)建——兔骺板軟骨細(xì)胞分

3、別與多孔聚乳酸、多孔絲素構(gòu)建兩種組織工程骺板并比較其體外相容性 目的:探索兔骺板軟骨細(xì)胞與生物支架材料復(fù)合構(gòu)建組織工程骺板的可行性。 方法:將體外培養(yǎng)的第三代兔骺板軟骨細(xì)胞分別與多孔聚乳酸材料、多孔絲素材料復(fù)合，構(gòu)建兩種組織工程骺板。應(yīng)用掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡、MTT等方法，對(duì)細(xì)胞與材料的相容性進(jìn)行觀察，并對(duì)兩種生物支架材料進(jìn)行比較。 結(jié)果:兔骺板軟骨細(xì)胞在支架材料上生長(zhǎng)良好，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，分裂增殖的細(xì)

4、胞逐漸增多。細(xì)胞在兩種材料上生長(zhǎng)情況類似，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示無(wú)顯著性差異。 結(jié)論:多孔聚乳酸材料和多孔絲素材料均具有良好的生物相容性，可以作為骺板組織工程理想的載體材料。 三、組織工程骺板治療骺板損傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究——兩種組織工程骺板分別治療骺板損傷并對(duì)其進(jìn)行比較 目的:探索組織工程骺板在治療骺板損傷中的作用。 方法;將兩種組織工程骺板分別植入骺板損傷的模型中，同時(shí)設(shè)單純植入材料組、空白對(duì)照組。應(yīng)用組織學(xué)、Brd

5、U細(xì)胞示蹤、X線等方法，觀察成角畸形和短縮畸形情況。同時(shí)對(duì)兩種組織工程骺板、以及兩種支架材料進(jìn)行比較。 結(jié)果;空白組，骨橋明顯，短縮畸形和成角畸形顯著；單純植入支架材料組，短縮畸形和成角畸形明顯；組織工程骺板組，存在較小的短縮畸形和成角畸形。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示三種方法存在顯著性差異，兩種組織工程骺板之間，兩種支架材料之間無(wú)顯著性差異。 結(jié)論:組織工程骺板治療骺板損傷是一種有效的方法，其療效優(yōu)于單純植入生物支架材料。 四、

6、人骨骺軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)及鑒定的初步研究 目的:建立體外培養(yǎng)及鑒定人骨骺軟骨細(xì)胞的方法。 方法;取人多指切除手術(shù)之多指骨骺，先行機(jī)械剪切，后用胰蛋白酶及Ⅱ型膠原酶消化，再接種于1640培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)。應(yīng)用蕃紅花“O”——亮綠染色，Alcian blue染色，免疫組化Ⅱ型膠原染色和MTT檢測(cè)，對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了觀察和鑒定。 結(jié)果;在體外觀察到了人骨骺軟骨細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)及傳代的生長(zhǎng)過(guò)程，多次傳代后增殖能力降低。蕃紅花