若干肺癌分子標記物與其生物行為及療效的關(guān)系.pdf

1、背景：近年來，肺癌的發(fā)病率和死亡率持續(xù)上升，已經(jīng)排在各種惡性腫瘤的第一位，其中非小細胞肺癌(nosmallcelllungcancer，NSCLC)占80％左右。臨床初診時50％的患者已經(jīng)發(fā)生遠方轉(zhuǎn)移，常為多處轉(zhuǎn)移，且相當一部分是常規(guī)檢查難以發(fā)現(xiàn)的，造成術(shù)后很快復發(fā)。目前，治療遠方轉(zhuǎn)移的主要方法為化療，但治療效果差，容易發(fā)生耐藥。而常用的觀測指標如MDR、外周血中的肺癌標記物(CEA、NSE、CYFRA21-1)等種類單一，難以全面、準

2、確、及時地提示腫瘤分化、生長、播散轉(zhuǎn)移和對治療反應等多種特點和行為。因此，尋找更為敏感的預測早期轉(zhuǎn)移和療效的指標、并將其與現(xiàn)有指標結(jié)合起來形成有效的“標記物群”尤為重要。 目的：分別選取可反應腫瘤增殖、分化、轉(zhuǎn)移、凋亡及新生血管形成等方面的指標，著眼于腫瘤組織與外周血的聯(lián)合檢測，結(jié)合病例隨訪資料得出結(jié)論，以闡明若干相互關(guān)聯(lián)、且可能有重要臨床意義的肺癌標記物間的內(nèi)在聯(lián)系和相關(guān)臨床意義。 方法：本研究共分三部分。第一部分：腫

3、瘤組織檢測。應用免疫組化方法檢測腫瘤組織Survivin、VEGF、COX-2、C-erbB2蛋白。 第二部分：治療前后外周血標本檢測。包括：流式細胞術(shù)檢測CECs；RT-PCR法半定量檢測生存素基因表達的陽性率及定量PCR法定量檢測其含量；電化學發(fā)光法檢測外周血肺癌標志物(CYFRA21-1；CEA；NSE)。 第三部分：對隨訪20個月的病例進行生存分析。結(jié)果：1.腫瘤標本檢測結(jié)果：37例病人中30例可獲取手術(shù)標本臘塊

4、。(1)各指標間的相關(guān)性：Survivin、C-erbB2、COX-2、VEGF蛋白的表達陽性率分別為60％、46.67％、56.67％、63.33％。等級相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)Survivin、COX-2、VEGF三者互呈正相關(guān)，C-erbB2僅與Survivin互呈正相關(guān)，而與其它二者表達不相關(guān)。Survivin與C-erbB2、COX-2、VEGF間的相關(guān)系數(shù)分別為0.572、0.647，0.754，COX-2與VEGF間的相關(guān)系數(shù)為0.7

5、35，P值均＜0.05。(2)各指標與臨床病理因素間的關(guān)系：Survivin、C-erbB2、VEGF蛋白的表達陽性率在不同年齡、性別、病理類型組間的差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)，而在不同原發(fā)腫瘤直徑(直徑≥3cm與＜3cm)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移組間的差異有統(tǒng)計學意義，(P均＜0.05)。COX-2蛋白的表達陽性率則在不同年齡、性別、病理類型及不同原發(fā)腫瘤直徑、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移組間的差異均無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05

6、)。 2.患者外周血中觀察指標檢測結(jié)果：(1)CECs與臨床病理因素及療效間的關(guān)系：37例患者治療前的CECs數(shù)量以及治療前、后的CECs數(shù)量的變化在不同年齡、性別、病理類型、不同原發(fā)腫瘤直徑(直徑≥3cm與＜3cm)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移組間差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)。受益組治療后CECs數(shù)量減少，進展組治療后CECs數(shù)量增加，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。 (2)Survivin與臨床病理因素及療效

7、間的關(guān)系：37例NSCLC患者中檢測出SurvivinmRNA者24例。治療前其含量及治療前后含量的變化在不同年齡、性別、病理類型組間的差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)，而在不同原發(fā)腫瘤直徑(直徑≥3cm與＜3cm)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移組間的差異有統(tǒng)計學意義，(P均＜0.05)?；熀笫芤娼MSurvivinmRNA含量減少，進展組SurvivinmRNA含量增加，二者差異有統(tǒng)計學意義P=0.000。 (3)CECs及Su

8、rvivin與腫瘤標本各指標間的相關(guān)性：患者術(shù)前外周血Survivin的mRNA量僅與術(shù)后標本中其蛋白的表達量呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)0.648，P=0.023)，而與術(shù)后標本中C-erbB2、COX-2、VEGF蛋白表達量均不具相關(guān)性。術(shù)前患者外周血CECs數(shù)量與術(shù)后標本Survivin與C-erbB2、COX-2、VEGF蛋白表達量均不具相關(guān)性(P均＞0.05)。 (4)其他血肺癌標志物(CEA、CYFRA21-1、NSE)與臨床

9、病理因素及療效間的關(guān)系：治療前CEA、CYFRA21-1、NSE在不同年齡、性別組的差異無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)。CEA在鱗癌和腺癌中陽性率分別為39.1％、92.9％，差異有統(tǒng)計學意義，CYFRA21-1在腺癌和鱗癌中陽性率分別為35.7％，73.9％，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，NSE在鱗癌及腺癌中表達無差異。三者在不同原發(fā)腫瘤直徑(直徑≥3cm與＜3cm)、有無淋巴結(jié)及遠處轉(zhuǎn)移組間的差異有統(tǒng)計學意義，(P均＜0.05)

10、。原發(fā)腫瘤直徑＞3cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移者陽性率陽性率高。繼續(xù)分層，鱗癌組療效與CECs與SurvivinmRNA、CYFRA21-1數(shù)量的變化有關(guān)，受益者三者治療后含量減少，反之則增加，差異有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)，且CECS與SurvivinmRNA及CYFRA21-1數(shù)量的變化之間具有正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.544、0.523(P均＜0.05)，而SurvivinmRNA與CYFRA21-1數(shù)量的變化之間則不具相關(guān)性

11、。腺癌組療效與CECs及SurvivinmRNA、CEA數(shù)量的變化有關(guān)，受益者三者治療含量減少，反之則增加，差異有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)且三者變化均呈正相關(guān)。 3.影響長期生存的因素：Kaplan-Meier生存分析顯示治療方法、治療前、后CECs的變化及TTP時間都對生存時間有影響(LogRank檢驗P＜0.05)。內(nèi)皮抑素+化療組比單純化療組、TTP時間＜100天組比TTP時間≥100天組、治療前、后CECs的差值＜-

12、2比≥-2組的1年生存率高。 結(jié)論：1.非小細胞肺癌組織中Survivn、COX-2、VEGF三種蛋白表達互呈正相關(guān)，C-erbB2蛋白與Survivin蛋白表達呈正相關(guān)。提示四者可能相互作用，共同參與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展。 2.非小細胞肺癌組織中的Survivn、C-erbB2及VEGF三種蛋白的表達和外周血中SurvivinmRNA、CEA、NSE、CYFRA21-1的表達在有無遠方和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間有差異。提示這些

13、指標可能預測轉(zhuǎn)移。組織中COX-2蛋白及外周血CECs的表達在有、無遠方和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間無差異，提示此二者對腫瘤生物學行為和病期早、晚的預測不一定有明顯價值。 3.外周血SurvivinmRNA的表達與腫瘤組織中的蛋白表達呈正相關(guān)，提示檢測外周血SurvivinmRNA有可能代替腫瘤組織中Survivin蛋白檢測。 4.治療后外周血中的CECs、SurvivinmRNA、及CEA或CYFRA21-1的數(shù)量變化與非小細胞肺

14、癌療效有密切關(guān)系，提示其有可能預測短期療效。進一步分層研究，在肺腺癌組外周血中治療前、后的CECs、SurvivinmRNA及CEA量變化互呈正相關(guān)。在肺鱗癌組CECs分別與CYFRA21-1、SurvivinmRNA含量變化互呈正相關(guān)，但后兩者間不具相關(guān)性。提示在肺腺癌中調(diào)亡抑制蛋白、血管內(nèi)皮細胞及腫瘤特異標記物三者變化趨勢的一致性可能強于鱗癌，預測療效的價值可能也更大。 6.治療前、后CECs的變化差值、TTP時間、治療方法