蕈樣肉芽腫T細胞受體基因重排的分子生物學診斷研究.pdf

1、目的：探討檢測T細胞受體基因重排用于蕈樣肉芽腫的輔助診斷。蕈樣肉芽腫(MycosisFungoides，MF)又名蕈樣霉菌病，為原發(fā)于皮膚的T淋巴細胞瘤，大多疾病呈慢性經(jīng)過。臨床上典型的皮損依病程分3期：紅斑期、斑塊期和腫瘤期。但組織學上的改變直至斑塊期才有診斷價值，出現(xiàn)浸潤細胞親表皮現(xiàn)象、Pautrier微膿瘍和MF細胞。腫瘤期由于真皮大量異型性MF細胞浸潤，診斷相對容易。紅斑期皮損臨床表現(xiàn)復雜，可呈副銀屑病、銀屑病、玫瑰糠疹、特應性

2、皮炎、魚鱗病、扁平苔蘚和硬化樣改變。紅斑期組織學改變和臨床一樣，大多為非特異性。由于早期診斷的MF病例得到及時治療有良好的預后，因此早期診斷是一個非常重要的臨床課題。免疫組織化學技術檢測MF皮損中的T淋巴細胞分化抗原雖可作為輔助手段，但多難以確定皮損的良惡性。惡性腫瘤的一個顯著特點是增生的單克隆性，在淋巴瘤表現(xiàn)為淋巴細胞抗原受體分子重排的單克隆：B細胞淋巴瘤為免疫球蛋白基因單克隆性重排，T細胞淋巴瘤為T細胞受體(TCR)單克隆重排。根據(jù)

3、這一特點人們應用PCR技術對TCR-γ基因重排進行研究，發(fā)現(xiàn)在皮膚T細胞淋巴瘤有很高的特異性，結合臨床表現(xiàn)和組織病理，使陽性率明顯提高。 方法：采用“一步法”提取10％福爾馬林固定，石蠟包埋處理的皮膚活檢組織的DNA作為模板，應用聚合酶鏈反應/瓊脂糖凝膠電泳方法，檢測實驗組及對照組的TCR基因重排。其中實驗組包括61例蕈樣肉芽腫，對照組包括9例亞急性皮炎、8例扁平苔癬、7例點滴狀副銀屑病、7例急性痘瘡樣苔癬狀糠疹及20例來源于整

4、形外科切取的外觀正常皮膚組織。 結果：經(jīng)統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)2號及3號引物的x2值分別為0.000及0.127，P值分別為1.000和0.722，P值均大于0.05，無統(tǒng)計學意義，故在進行最后的統(tǒng)計中去除這兩組。對1號，4號引物的分析結果如下：其中實驗組1號陽性例數(shù)為34例，4號陽性例數(shù)為12例，兩者同時陽性例數(shù)為4例。故蕈樣肉芽腫組的陽性例數(shù)為50例(82.0％)，陰性例數(shù)為11例；對照組的陽性例數(shù)為13例(41.9％)，陰性例數(shù)為

5、18例。蕈樣肉芽腫組與對照組進行統(tǒng)計分析x2=15.260，P=0.000，有統(tǒng)計學意義。 結論： 1.用“一步法”提取MF石蠟包埋DNA作為模板可用于PCR/瓊脂糖凝膠電泳技術檢測TCR基因重排。且本方法省時省力，最大程度的避免在提取過程中DNA的損失。 2.紅斑期蕈樣肉芽腫出現(xiàn)典型病理特征的比例較少，僅靠病理組織學診斷紅斑期蕈樣肉芽腫較為困難。斑塊期和腫瘤期蕈樣肉芽腫病理特征突出，診斷相對容易。 3.