白囊耙齒菌液體深層發(fā)酵條件優(yōu)化及多糖研究.pdf

1、白囊耙齒菌[Irpex lacteus(Fr.) Fr.]是一種藥用真菌，在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中用于治療慢性腎小球炎癥，其液體發(fā)酵菌絲體多糖已被開(kāi)發(fā)生產(chǎn)“益腎康”藥物。隨著白耙齒菌產(chǎn)品臨床應(yīng)用的增加，其在治療腎炎、前列腺炎方面的藥用價(jià)值越來(lái)越得到認(rèn)可。在擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模的過(guò)程中，白耙齒菌液體發(fā)酵和多糖提取存在生產(chǎn)效率低及產(chǎn)品作用機(jī)制不明等問(wèn)題，因此迫切需要加強(qiáng)白耙齒菌液體深層發(fā)酵和多糖提取條件優(yōu)化的系統(tǒng)研究，提高生產(chǎn)效率，同時(shí)研究其多糖的結(jié)構(gòu)和作用機(jī)

2、制，為白耙齒菌產(chǎn)品的應(yīng)用及產(chǎn)品的國(guó)際化提供理論依據(jù)。
　　本試驗(yàn)主要通過(guò)野外采集標(biāo)本，分離菌株，通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)進(jìn)行鑒定，以確認(rèn)所用菌株的正確性。對(duì)白囊耙齒菌菌絲體生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)需求和培養(yǎng)條件進(jìn)行單因素試驗(yàn)，得到最佳培養(yǎng)溫度為30至35°C，菌絲生長(zhǎng)對(duì)pH不敏感，在供試pH為3-9條件下生長(zhǎng)均較好，黑暗培養(yǎng)有利于生物量積累，最佳接種量為10-15%。對(duì)菌絲生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)需求進(jìn)行研究，包括9種碳源，9種氮源，11種維生素，10種金屬元

3、素，得到最優(yōu)碳、氮源、金屬離子和維生素分別為可溶性淀粉，大豆蛋白胨，Ca2+和酵母提取物。正交試驗(yàn)優(yōu)化得到最佳半合成培養(yǎng)基為：可溶性淀粉60 g l-1，大豆蛋白胨25 g l-1，CaCl20.6 g l-1，酵母提取物15 g l-1。生長(zhǎng)曲線研究得到最佳發(fā)酵終止時(shí)間為6 d，發(fā)酵終止可獲得的最大生物量為19.34 g l-1。復(fù)合培養(yǎng)基試驗(yàn)結(jié)果表明添加麥麩、土豆都有利于白囊耙齒菌的生物量累積。
　　測(cè)定了白囊耙齒菌菌絲腺苷和

4、甘露醇的含量，腺苷含量為3.67 mg g-1，甘露醇含量為2.56%。成功用木屑栽培出白囊耙齒菌的子實(shí)體。
　　對(duì)白囊耙齒菌的菌絲體多糖通過(guò)透析純化，使用DEAE-52離子交換層析，經(jīng)Sephadex-G100凝膠層析純化，最后分離得到3組組分ILPS1，ILPS2，ILPS3。高效陰離子交換色譜對(duì)ILPS1、胞外粗多糖、胞內(nèi)粗多糖的單糖組分進(jìn)行了分析，三者單糖組成不完全相同。ILPS1以甘露糖為主，含有少量葡萄糖胺、半乳糖和葡