馬勃菌液體發(fā)酵條件的優(yōu)化及及其藥效成分初步篩選研究.pdf

1、馬勃(puffball)為常用真菌類中藥，其基源主要為大禿馬勃Calvatia gigantea、脫皮馬勃Lasiosphaera fenzlii和紫色馬勃Calvatia lilacina（Mont.et Berk）Lloyd的干燥子實(shí)體。馬勃的人工栽培尚處于起步階段，液體發(fā)酵菌絲具有培養(yǎng)周期短、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、便于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，且發(fā)酵液和子實(shí)體一樣也有抑菌、抗炎等藥理作用。因此，利用液體發(fā)酵技術(shù)進(jìn)行馬勃的生產(chǎn)一個(gè)重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。<

2、br>　　 本研究以大禿馬勃Calvatia gigantea和脫皮馬勃Lasiosphaera fenzlii 為研究材料，進(jìn)行了馬勃孢子的萌發(fā)條件研究，并以大禿馬勃Calvatia gigantea菌種為研究材料，進(jìn)行了優(yōu)化培養(yǎng)和發(fā)酵液藥理實(shí)驗(yàn)的初步研究，結(jié)果如下：
　　 采用DNA 分子鑒定技術(shù)對(duì)采集的樣品進(jìn)行了分子鑒定，結(jié)果為大禿馬勃Calvatia gigantea和脫皮馬勃Lasiosphaera fenzlii。

3、利用rDNA ITS 序列進(jìn)行分析并建構(gòu)系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明了脫皮馬勃Lasiosphaera fenzlii和大禿馬勃Calvatiagigantea的親緣關(guān)系較近，根據(jù)分子系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹可將其歸屬傘菌亞綱、傘菌目。
　　 對(duì)大禿馬勃Calvatia gigantea和脫皮馬勃Lasiosphaera fenzlii的孢子萌發(fā)進(jìn)行了不同溫度、不同營(yíng)養(yǎng)物及濃度和光照等條件對(duì)其孢子萌發(fā)影響的研究。結(jié)果表明，25℃是馬勃孢子萌發(fā)的適

4、宜溫度；2％的葡萄糖和Bonar 液可促進(jìn)孢子萌發(fā)，而氯化鈉則對(duì)孢子萌發(fā)有抑制作用；光照或黑暗對(duì)孢子萌發(fā)無影響；來源于兩個(gè)不同年份的孢子的萌發(fā)率差異不顯著。
　　 研究了不同培養(yǎng)基、不同培養(yǎng)條件對(duì)大禿馬勃Calvatia gigantea菌絲體生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明：綜合PDA 培養(yǎng)基為大禿馬勃Calvatia gigantea的最佳培養(yǎng)基，并在此基礎(chǔ)篩選到麥芽糖為最佳碳源。最適菌絲體生長(zhǎng)的條件為：培養(yǎng)溫度為26℃、pH 值為6.

5、0。
　　 利用L9(3)3 正交試驗(yàn)篩選出了大禿馬勃Calvatia gigantea 液體深層發(fā)酵的優(yōu)化培養(yǎng)基。結(jié)果表明：最佳碳源和氮源分別為蔗糖、馬鈴薯和黃豆粉，最佳的水平組合為蔗糖20g/L、馬鈴薯粉300g/L、黃豆粉30g/L；得到的最佳培養(yǎng)條件為6d的種齡，10％的接種量、100mL/250mL的裝液量，初始pH6.0，28℃培養(yǎng)溫度，180r/min的搖床轉(zhuǎn)速，培養(yǎng)時(shí)間為12d。
　　 大禿馬勃Calva

6、tia gigantea 發(fā)酵液的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取物進(jìn)行二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓急性炎癥和醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明大禿馬勃Calvatia gigantea 發(fā)酵液石油醚提取物處理組、乙酸乙酯提取物處理組對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹具有明顯的抑制作用；大禿馬勃Calvatia gigantea 發(fā)酵液乙酸乙酯提取物處理組、正丁醇提取物處理組對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性具有明顯的抑制作用。在抑菌試驗(yàn)中，大禿馬勃Ca