菟絲子黃酮干預(yù)雄性幼鼠、成鼠生殖損傷及C-myc基因表達(dá)的對比研究.pdf

1、　　目的：通過觀察臨床高劑量的雷公藤多苷、菟絲子黃酮對幼鼠和成鼠的生殖作用,研究菟絲子黃酮對雷公藤多苷所致的大鼠性腺損傷的調(diào)節(jié)作用并探討其機(jī)理。為臨床科學(xué)應(yīng)用雷公藤多苷,研制毒副作用更小的復(fù)方雷公藤制劑提供初步依據(jù)。
　　方法：雄性SD大鼠180只,幼鼠和成鼠各自隨機(jī)分組,每組30只,共6組,分別為幼鼠空白組(A)、幼鼠雷公藤多苷組(B)、幼鼠菟絲子黃酮組(C)、成鼠空白組(D)、成鼠雷公藤多苷組(E)、成鼠菟絲子黃酮組(F)

2、。A 組與 D 組給予 1%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃,B 組與 E 組給予雷公藤多苷片灌胃,C 組與 F組予雷公藤多苷及菟絲子黃酮灌胃。實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由進(jìn)食。灌胃12周時停止喂藥,每組隨機(jī)處死 10 只動物,取左側(cè)睪丸少許組織進(jìn)行 C-myc 基因研究,剩余睪丸組織進(jìn)行 HE 染色觀察組織形態(tài)學(xué)變化,右側(cè)睪丸組合酶消化法制作單細(xì)胞混懸液,分析各倍體細(xì)胞的百分比、生精細(xì)胞周期及凋亡情況。停藥5周時,每組剩余動物分籠喂養(yǎng),并按雌雄1：1配對,

3、觀察各籠雌鼠一次合籠后的產(chǎn)仔率。
　　結(jié)果：
　　1.睪丸組織形態(tài)學(xué)觀察：兩空白組大鼠睪丸病理切片正常；兩多苷組大鼠較各自空白組相比,睪丸曲細(xì)精管腔內(nèi)上皮變薄,細(xì)胞層次紊亂,精原細(xì)胞、精母細(xì)胞較少,精子細(xì)胞及精子減少明顯,某些生精細(xì)胞腫脹變性,偶見間質(zhì)輕度水腫。兩黃酮組病理改變較各自多苷組輕。幼鼠組和成鼠組組間相比差異不顯著(P>0.05),幼鼠多苷組和幼鼠黃酮組、成鼠多苷組和成鼠黃酮組比較有明顯差異(P<0.05)

4、。
　　2.生精細(xì)胞各倍體百分比：相較于各自空白組,兩多苷組的 1C細(xì)胞群和2C細(xì)胞群均減少,且差異顯著(P<0.05),黃酮組較多苷組升高；幼鼠黃酮組的 1C細(xì)胞群較幼鼠多苷組相比差異顯著( P<0.05)；4C 細(xì)胞群中,兩多苷組均增加,幼鼠多苷組與空白組比較有顯著差異(P<0.05)；在 1C、2C和 4C細(xì)胞群中,幼鼠組和成鼠組相比均無統(tǒng)計學(xué)意義( P>0.05)。
　　3.生精細(xì)胞各時相百分比：相較于空白組

5、,兩多苷組 S 期細(xì)胞均值有所增加,成鼠多苷組G0/G1期細(xì)胞均值減少,但均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；且各組之間相比無顯著差異(P>0.05)。
　　4.生精細(xì)胞凋亡比例：相較于各自空白組,幼鼠、成鼠多苷組生精細(xì)胞凋亡增加,且差異顯著(P<0.05)；相較于各自多苷組,兩黃酮組凋亡減少,且差異著(P<0.05)；幼鼠組和成鼠組組間相比均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　5.雌鼠產(chǎn)仔率：停藥 5 周,幼鼠多苷組和

6、黃酮組大鼠一次合籠后所對應(yīng)的雌鼠產(chǎn)仔率分別為 85%、90%；相較于空白組的平均產(chǎn)仔時間,兩多苷組有所延長,且差異顯著(P<0.05)；各組的平均胎仔數(shù)組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　6.有關(guān)基因表達(dá)：幼鼠多苷組的 C-myc基因表達(dá)量最高,幼鼠黃酮組最低。且幼鼠多苷組和幼鼠黃酮組組間比較差異顯著( P<0.05),幼鼠多苷組和成鼠多苷組、幼鼠黃酮組和成鼠黃酮組組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　

7、結(jié)論：
　　1.臨床高劑量雷公藤多苷對幼鼠和成鼠的生殖均有損傷,且損傷程度相仿。
　　2.菟絲子黃酮可通過抑制精子細(xì)胞和精子的凋亡來干預(yù)雷公藤多苷對大鼠生精細(xì)胞的影響。
　　3.雷公藤多苷和菟絲子黃酮對生精細(xì)胞的周期改變無顯著作用。
　　4.雷公藤多苷可能促進(jìn)大鼠 C-myc基因在睪丸生精細(xì)胞中的表達(dá),菟絲子黃酮對此有抑制作用。在使用雷公藤多苷和菟絲子黃酮后 C-m yc基因在幼鼠和成鼠生精細(xì)胞中