2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:目前食管癌(Esophageal cancer)是全世界最常見的惡性腫瘤之一,在我國尤為突出,是發(fā)病率最高的國家。食管癌惡性程度高,且大部分患者得到臨床確診后已屬晚期,預(yù)后極差,對于早期患者手術(shù)盡管是目前治療的首先方式,但手術(shù)后容易復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。癌細(xì)胞早期容易侵襲轉(zhuǎn)移是其主要原因,另外,術(shù)后缺乏敏感的抑制腫瘤細(xì)胞的藥物,常用的化療藥物靶向效應(yīng)不強,副反應(yīng)較重等也是食管癌患者生存率較低的重要原因之一。Hedgehog(Hh)信號通

2、路由Hh-Ptch-Smo-Gli級聯(lián)構(gòu)成,當(dāng)Hh蛋白配體與膜受體Ptch結(jié)合時,可以消除膜受體Ptch對Smo的抑制效應(yīng), Smo的激活又可進(jìn)一步激活核轉(zhuǎn)錄因子Gli,從而誘導(dǎo)下游目標(biāo)基因的表達(dá)。近年研究顯示Hh信號通路與人類乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌等多種腫瘤的發(fā)病及轉(zhuǎn)移密切相關(guān),食管癌的Hh通路高度激活也已得到證實,但Hh通路與食管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系卻缺乏深入的研究。已證實血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(M

3、MP-9)與食管癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān),也有研究表明二者與Hh通路有密切聯(lián)系,但具體作用機(jī)制的研究仍處于初級階段。
   目的:本實驗以食管癌EC109細(xì)胞系為研究對象,利用Hh信號通路特異性阻滯劑環(huán)巴胺(Cyclopamine)處理EC109細(xì)胞,然后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的變化及轉(zhuǎn)移相關(guān)因子MMP-9、VEGF蛋白表達(dá)水平的影響,并分析其可能的機(jī)制,為臨床食管癌靶向藥物的研究提供理論與實驗依據(jù)。
   方法:

4、   1.培養(yǎng)EC109細(xì)胞為實驗對象,用Hh信號通路特異性阻滯劑環(huán)巴胺(Cyclopamine)作用EC109細(xì)胞后,MTT法觀察環(huán)巴胺對EC109細(xì)胞的抑制作用,并計算出相應(yīng)的半數(shù)抑制率(IC50)。
   2.Transwell小室法觀察經(jīng)環(huán)巴胺處理后EC109細(xì)胞的遷移、侵襲能力的變化。
   3.體外血管生成實驗觀察環(huán)巴胺對EC109細(xì)胞在體外血管形成能力的影響。
   4.RT-PCR方法檢測食管癌

5、細(xì)胞經(jīng)環(huán)巴胺處理后的Gli-1mRNA表達(dá)變化。
   5.Western blot方法檢測食管癌細(xì)胞經(jīng)環(huán)巴胺處理后Gli-1、MMP-9、VEGF蛋白的表達(dá)變化。
   結(jié)果:
   1.環(huán)巴胺處理EC109細(xì)胞后可以抑制其增殖及生長,細(xì)胞由飽滿的梭形貼壁生長狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)檩喞磺宓膱A鈍半貼壁狀態(tài),在一定濃度下抑制率隨濃度增高而增大且具有相關(guān)性,且干預(yù)的時間越長,其抑制率也隨之加大,在相當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)具有藥物作用時間和

6、作用濃度依賴性。作用2天后的IC50為12μmol/L。
   2.在Transwell小室實驗中我們發(fā)現(xiàn),環(huán)巴胺阻斷Hh信號通路后,與對照組相比,食管癌細(xì)胞的體外遷移、侵襲及血管形成能力顯著下降,遷移出小室微孔膜的細(xì)胞數(shù)明顯減少(32.80±6.77) vs(98.40±10.08),侵襲穿膜細(xì)胞數(shù)也明顯減少(26.20±4.58) vs(83.40±8.65);血管形成數(shù)減少(8.60±2.70) vs(19.40±4.86

7、)。
   3.以RT-PCR方法檢測發(fā)現(xiàn),環(huán)巴胺干預(yù)后的食管癌細(xì)胞Gli-lmRNA表達(dá)較對照組明顯下降(2.89±0.34) vs(5.58±0.89))。
   4.通過Western blot方法對蛋白水平的檢測發(fā)現(xiàn),實驗組與對照組相比, Gli-1、MMP-9和VEGF蛋白的相對表達(dá)量都下降。
   結(jié)論:EC109細(xì)胞中具有激活狀態(tài)的Hh信號通路,且能被環(huán)巴胺阻斷,阻斷Hh信號通路后能顯著抑制EC10

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