PAR2在食管癌中的表達(dá)及胰蛋白酶對EC109細(xì)胞增殖移動的影響.pdf

1、背景和目的：
　　蛋白酶活化受體2 protease-activated receptor 2(PAR2)是蛋白酶活化受體(protease-activated receptors PARs)家族成員,屬于G蛋白偶聯(lián)受體G protein-coupled receptor(GPCRs)。PAR2被胰蛋白酶(胰酶)活化后,通過細(xì)胞間的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),進(jìn)而影響細(xì)胞的生物學(xué)行為?，F(xiàn)階段研究表明,PAR2與多種腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移有關(guān)。盡管已經(jīng)有不

2、少研究結(jié)果表明PAR2在多種惡性腫瘤中有重要的作用,但是其在食管癌組織中的表達(dá)和與臨床疾病發(fā)展的關(guān)系及其作用尚未闡明。本文通過研究PAR2在食管癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理和預(yù)后的關(guān)系,同時研究在食管癌細(xì)胞EC109中的表達(dá)及其與食管癌細(xì)胞增殖移動的關(guān)系,從而了解PAR2在食管癌發(fā)展中的作用。
　　材料與方法：
　　1、臨床研究對象收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院2002、2007～2010年間食管癌組織標(biāo)本124例,其中49

3、例有相對應(yīng)的癌旁粘膜組織和切緣正常粘膜組織,75例有五年的隨訪記錄(38例接受術(shù)后放療或化療,37例是單純的手術(shù)治療);58例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,66例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;組織學(xué)分級Ⅰ級40例,Ⅱ級73例,Ⅲ級11例。
　　2、HE染色(hematoxylin and eosin staining,HE)切片常規(guī)HE染色,鏡下觀察,進(jìn)行組織學(xué)診斷。
　　3、免疫組織化學(xué)染色(Immunohistochemistry,IHC)Immun

4、oCruzTM Staining System三步法檢測石蠟組織切片中PAR2蛋白的表達(dá)情況。二步法檢測相同病例的石蠟組織切片中CD34(內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記)的表達(dá)情況。
　　4、細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)10％BSA DMEM培養(yǎng)食管癌EC109細(xì)胞系。
　　5、免疫熒光細(xì)胞染色(immunofluorescence cell staining,IIF)用FITC(異硫氰酸熒光素)間接法檢測PAR2蛋白的表達(dá)情況,熒光顯微鏡下觀察PAR

5、2蛋白在食管癌EC109細(xì)胞中的定位。
　　6、MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)法檢測胰蛋白酶對食管癌EC109細(xì)胞的增殖的影響。
　　7、細(xì)胞遷移實驗(cell migration assay)Transwell小室法檢測胰蛋白酶對食管癌EC109細(xì)胞的移動能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組化在食管癌組織中,PAR2蛋白主要表達(dá)于食管癌癌細(xì)胞的胞漿或胞膜上,表達(dá)的陽性率為

6、65.3%(81/124),分別與切緣正常粘膜上皮中表達(dá)的陽性率(30.6%,15/49)和癌旁粘膜上皮中表達(dá)的陽性率(32.7%,16/49)相比,均有高度的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。在組織學(xué)分級中Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級的陽性率分別為55%、74%、45.5%。Ⅰ級和Ⅱ級之間的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),Ⅱ級和Ⅲ級之間的差別無統(tǒng)計學(xué)意義。PAR2蛋白表達(dá)陽性的病人的微血管密度為23.59±8.93,表達(dá)陰性的病人為23.27±8.1

7、7,兩者之間差別不大。在單純手術(shù)治療的病人中,PAR2蛋白表達(dá)陽性的病人(28.55±5.43月)生存時間少于PAR2蛋白表達(dá)陰性者(32.33±6.49月),但是差別無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、免疫熒光食管癌上皮細(xì)胞EC109表達(dá)PAR2。
　　3、MTT法胰酶對EC109細(xì)胞的增殖作用較復(fù)雜。
　　4、細(xì)胞遷移實驗胰酶對EC109細(xì)胞的遷移能力有一定的促進(jìn)作用。
　　結(jié)論：
　　1、PAR2蛋白在食管癌癌組

8、織中的陽性表達(dá)率達(dá)65.3%,明顯高于切緣正常粘膜上皮和癌旁正常粘膜上皮。Ⅱ級的陽性率明顯高于Ⅰ級,提示PAR2的活化對食管癌的較早期發(fā)展可能有一定的作用。
　　2、PAR2蛋白在食管癌癌組織中的表達(dá)與腫瘤微血管密度沒有明顯關(guān)系,提示在食管癌中,PAR2蛋白的活化可能不是通過影響腫瘤血管的生長而影響腫瘤的發(fā)展。
　　3、PAR2蛋白表達(dá)陽性的病人生存時間少于PAR2蛋白表達(dá)陰性者,統(tǒng)計沒有意義。PAR2蛋白表達(dá)陽性與病人生存