桂苓消異方含藥血清對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)及分泌IL-6，IL-8影響的研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥是常見的婦科疑難疾病之一，是指有活力的子宮內(nèi)膜組織(腺體和間質(zhì))在正常子宮腔面以外的部位出現(xiàn)和增殖的疾病，長(zhǎng)期以來，這種性質(zhì)良性而行為卻類似惡性的疾病一直困惑著臨床醫(yī)生。本課題著重探討桂苓消異方治療該病的理論基礎(chǔ)，并建立人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的體外純化培養(yǎng)方法，并觀測(cè)藥物血清對(duì)體外培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)以及上清液分泌IL-6，IL-8的影響，初步研究桂苓消異方對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的影響及其作用機(jī)理。 一、桂苓消異方治療子宮內(nèi)膜

2、異位癥的理論探討 祖國(guó)醫(yī)學(xué)無子宮內(nèi)膜異位癥病名，其主要癥狀與中醫(yī)的痛經(jīng)，癥瘕，不孕等病癥密切相關(guān)。因腎主生殖的功能異常，加之經(jīng)期、產(chǎn)后生活不節(jié)等，導(dǎo)致沖任損傷及胞宮的藏瀉功能異常，而發(fā)生本癥，腎虛多為發(fā)病之根本，血瘀是重要的致病因素和病理表現(xiàn)。治療當(dāng)從溫腎化瘀著手。 桂枝茯苓丸最初出于《金匱要略》，為治療胎漏之劑，仲景本意用于妊娠之后癥積害胎，胎元不固者，若用于臨床消癥散積，有病重藥輕之嫌，一須增強(qiáng)活血化瘀藥力，二須結(jié)合

3、辨證加減運(yùn)用。導(dǎo)師在原方基礎(chǔ)上去甘緩之蜜，加仙靈脾以溫腎陽、血竭粉以增強(qiáng)祛瘀散結(jié)的力量，組成桂苓消異方用于臨床取得較好療效。這為本課題以溫腎化瘀中藥進(jìn)行子宮內(nèi)膜異位癥的體外實(shí)驗(yàn)研究，奠定了臨床和理論基礎(chǔ)。 二、初步建立人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的體外純化培養(yǎng)方法 收集2007年4月至2008年10月在揚(yáng)州市第一人民醫(yī)院和揚(yáng)州市中醫(yī)院婦產(chǎn)科接受手術(shù)治療子宮內(nèi)膜異位癥的患者的在位子宮內(nèi)膜，原代分離培養(yǎng)間質(zhì)細(xì)胞并傳代，利用顯微鏡觀察細(xì)

4、胞生長(zhǎng)增殖情況，免疫組化法鑒定細(xì)胞純度。 結(jié)果顯示，以篩網(wǎng)分離法為主，體外純化的人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖狀況良好，實(shí)驗(yàn)觀察期間均為單一的間質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞傳代4-5代，成活25-30天。免疫組化顯示所得的間質(zhì)細(xì)胞純度>95％。 證實(shí)在本實(shí)驗(yàn)條件下，體外分離純化的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞具備良好的增殖能力，且內(nèi)異癥與非內(nèi)異癥內(nèi)膜均可分離培養(yǎng)成功(P>0.05)內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的取材時(shí)期對(duì)細(xì)胞成活率以及增殖能力有影響(P<0.05)，為揭

5、示子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制以及藥效學(xué)研究建立良好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。 三、桂苓消異方對(duì)間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)以及培養(yǎng)上清液分泌IL-6，IL-8的影響 制備桂苓消異方藥物血清，用不同藥物劑量干預(yù)子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察形態(tài)變化，并收集藥物作用24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間段的細(xì)胞培養(yǎng)上清液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法定量檢測(cè)其分泌的細(xì)胞因子IL-6，IL-8。 通過形態(tài)學(xué)觀察，初步確定了桂