霉菌細胞壁β-葡聚糖對潰瘍性結(jié)腸炎腸道粘膜免疫的影響.pdf

1、背景：腸道菌群多態(tài)性改變是炎癥性腸?。↖BD）的發(fā)病機制之一，腸道中含有的共生霉菌可能參與IBD的發(fā)生發(fā)展，其中霉菌的主要識別受體Dectin-1可誘導固有免疫及適應(yīng)性免疫反應(yīng)，參與腸道的抗菌作用。腸道上皮細胞（IECs）發(fā)揮著重要的免疫屏障功能維持腸道穩(wěn)態(tài)。然而，尚缺乏三者在潰瘍性結(jié)腸炎中的作用及機制研究。
　　第一部分霉菌細胞壁成分β-葡聚糖對小鼠腸炎的影響
　　目的：研究霉菌細胞壁成分β-葡聚糖對腸炎小鼠模型腸道組織炎

2、癥的影響、相關(guān)炎癥因子表達情況及調(diào)控機制。方法：采用dnTGFβRII腸炎小鼠模型及野生型小鼠給予β-葡聚糖灌胃給藥，通過蘇木精-伊紅染色法對小鼠腸道組織進行病理評分；通過免疫組織化學及Western blot方法，檢測腸道組織中相關(guān)炎癥因子的表達情況。結(jié)果：1. dnTGFβRII腸炎小鼠模型中，給藥組小鼠體重較對照組減輕明顯（*P＜0.05，**P＜0.01），野生型小鼠則表現(xiàn)為體重增長緩慢（*P＜0.05）；2.在dnTGFβRI

3、I腸炎小鼠模型中，給藥組小鼠腸道炎癥評分及相關(guān)炎癥因子表達顯著高于對照組(*P＜0.05)；在野生型小鼠中，給藥組小鼠腸道炎癥評分及相關(guān)炎癥因子表達與對照組小鼠相比無明顯差異；3.在dnTGFβRII腸炎小鼠模型中，處理組小鼠腸道組織中IL-23p19表達量明顯增（**P＜0.01）。結(jié)論：霉菌細胞壁成分β-葡聚糖可加重dnTGFβRII腸炎小鼠模型中腸道炎癥及相關(guān)炎癥因子的表達，而對野生型小鼠腸道炎癥無明顯影響，提示其在IBD發(fā)病機制

4、中可能發(fā)揮的重要作用。
　　第二部分β-葡聚糖通過C型凝集素受體Dectin-1誘導結(jié)腸上皮內(nèi)的炎癥
　　目的：探討β-葡聚糖對結(jié)腸上皮內(nèi)炎癥的影響及其受體Dectin-1在此過程中的調(diào)控機制。方法：用β-葡聚糖小分子微粒酵母聚糖（zymosan）處理人結(jié)腸上皮細胞HT29和Caco2細胞株，以Western blot檢測相關(guān)因子IL-23p19的表達水平，以及zymosan對結(jié)腸上皮中NF-κB途徑蛋白激酶磷酸化的影響。N

5、F-κB特異性抑制劑（MD0354）和Dectin-1受體競爭性抑制劑（Laminarin）預(yù)處理后對腸上皮細胞內(nèi)相關(guān)炎癥因子的表達及NF-κB途徑蛋白激酶磷酸化的影響。結(jié)果：1. Zymosan可通過腸上皮細胞表達的受體Dectin-1識別誘導細胞內(nèi)炎癥反應(yīng)，增加相關(guān)炎癥因子IL-23p19的分泌量；2.Zymosan刺激后，WB觀察到腸上皮細胞胞漿中IκB磷酸化明顯增加，NF-κBp65隨之活化。結(jié)論：Zymosan可通過腸道上皮細

6、胞表達的Dectin-1受體識別激活下游促進炎癥反應(yīng)，參與IBD發(fā)病機制中腸道上皮內(nèi)屏障的損傷。
　　第三部分 Dectin-1參與結(jié)腸上皮細胞炎癥反應(yīng)及其信號通路調(diào)控
　　目的：研究Dectin-1、IL-23p19在IBD患者腸道粘膜中的表達，以及NF-κB途徑相關(guān)蛋白激酶磷酸化程度。結(jié)果：1.IBD患者糞便樣本中致病性霉菌增多；2.IBD患者結(jié)腸粘膜中 Dectin-1、IL-23p19的表達較正常對照組明顯增高(**