BmNPV在家蠶抗病品種和感病品種體內(nèi)感染及相關(guān)差異表達(dá)基因的分析.pdf

1、家蠶是我國(guó)主要的經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)。家蠶核型多角體病(Bombyx morinuclear polyhedrosis virus，BmNPV)給蠶業(yè)養(yǎng)殖帶來(lái)了很大的經(jīng)濟(jì)損失。由于缺少有效的防治藥物，世界各主要養(yǎng)蠶國(guó)家都致力于控制該病，希望能找到抗病毒物質(zhì)。同時(shí)家蠶和BmNPV又是研究桿狀病毒與昆蟲(chóng)宿主之間相互作用的良好模式生物。對(duì)家蠶抗BmNPV免疫機(jī)理的認(rèn)識(shí)有助于防控農(nóng)林業(yè)害蟲(chóng)。本次實(shí)驗(yàn)中以病毒高抗性家蠶品種，感病品種以及近等基因系為研究對(duì)象，

2、熒光定量PCR對(duì)三個(gè)家蠶體內(nèi)的病毒拷貝數(shù)進(jìn)行了定量。采用熒光差異顯示的方法對(duì)添毒24小時(shí)后不同家蠶品種的中腸組織進(jìn)行了基因表達(dá)差異分析，取得了以下結(jié)論。 1．熒光定量PCR檢測(cè)BmNPV病毒在家蠶抗病品種和感病品種體內(nèi)的增殖曲線。熒光定量PCR靈敏度高，特異性好，在感染病毒2小時(shí)后即可在中腸組織中檢測(cè)到病毒。在感病品種中，中腸，脂肪體和血淋巴均為BmNPV易感組織。病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)典型的增殖曲線，整個(gè)過(guò)程分為三個(gè)階段：潛伏期

3、(0～24h)；快速增長(zhǎng)期(24～60h)；平臺(tái)期(72h以后)。在抗病品種中，各組織中均可檢測(cè)到病毒。在感染早期(0～24h)，病毒拷貝數(shù)在抗病品種中先經(jīng)歷小幅上升。隨著感染的繼續(xù)，48小時(shí)后病毒被抑制在低水平波動(dòng)。在感染晚期(72h以后)，抗病品種與感病品種之間的病毒數(shù)呈現(xiàn)極大的差異性。本次研究首次全程動(dòng)態(tài)地觀測(cè)了病毒在抗病品種體內(nèi)的增殖過(guò)程。從分子水平上表明抗病品種通過(guò)抑制體內(nèi)病毒的復(fù)制顯示其高抗性。 2．病毒感染家蠶后的

4、差異基因表達(dá)譜。本試驗(yàn)采用3個(gè)錨定引物與20個(gè)隨機(jī)引物組合，對(duì)中腸總：RNA進(jìn)行了FDD-PCR分析。檢測(cè)結(jié)果覆蓋了近50％的中腸細(xì)胞mRNA，共獲得17個(gè)差異條帶，其中有10個(gè)片段的表達(dá)在抗病品種中被上調(diào)。進(jìn)行BLAST分析，發(fā)現(xiàn)其中有11個(gè)基因是首次在家蠶中被發(fā)現(xiàn)。從獲得的差異表達(dá)片段看，病毒感染引起家蠶多方面的差異調(diào)控，這包括DNA復(fù)制，基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控，蛋白質(zhì)翻譯，蛋白質(zhì)糖脂代謝等等。 3．獲得的差異表達(dá)基因特征和功能分析。