主栽抗病品種對RSV的抗性特征和抗病轉(zhuǎn)基因水稻材料的創(chuàng)制.pdf

1、由水稻條紋病毒（Rice stripe virus，RSV）引起的水稻條紋葉枯病是目前水稻生產(chǎn)上最重要的病毒病害，由介體灰飛虱（Aodelphax striatellus Fallén，SBPH）傳播。曾分布于我國16個省市，近年來在華東稻區(qū)嚴重發(fā)生，其中以粳稻主產(chǎn)區(qū)的江蘇省發(fā)生最為嚴重，自2004年江蘇省水稻條紋葉枯病特大爆發(fā)以來，全省共有42個縣發(fā)生此種病害，波及面積達2320萬畝，給水稻生產(chǎn)造成了巨大的損失。抗病品種的應用是防治病

2、害最經(jīng)濟有效的措施。
　　 本研究重點進行主栽抗病品種抗性特征的分析以及抗病毒轉(zhuǎn)基因材料的創(chuàng)制，主要研究內(nèi)容包括兩大方面。一是選取江蘇地區(qū)8個主栽抗病粳稻品種，采用苗期接種鑒定、非嗜性測驗和抗生性測驗的方法分析品種的抗病性和抗蟲性，二是通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將非病毒來源的2-5A系統(tǒng)基因?qū)胧荏w水稻鹽粳21中，獲得轉(zhuǎn)2-5A系統(tǒng)基因的水稻材料并對其進行抗病毒分析。主要結(jié)果如下：
　　 1、8個主栽抗病粳稻品種徐稻3號、徐稻4號

3、、鹽稻8號、鎮(zhèn)稻88、寧粳3號、鎮(zhèn)稻99、連粳4號和鎮(zhèn)稻8號的抗病性和抗蟲性表現(xiàn)并不一致?？共⌒苑治霭l(fā)現(xiàn)，供試品種均抗RSV；抗蟲性分析發(fā)現(xiàn)，鎮(zhèn)稻88和鎮(zhèn)稻99表現(xiàn)為較弱的抗蟲性，其余品種均表現(xiàn)為無抗蟲性。這表明供試抗病品種對水稻條紋葉枯病表現(xiàn)的抗性主要來源于對病毒的抗性。
　　 2、將2-5A合成酶基因和RNase L分別克隆到載體pAMM2106和pAMM2109上，農(nóng)桿菌法轉(zhuǎn)化水稻愈傷組織，獲得轉(zhuǎn)2-5A系統(tǒng)基因水稻。設計

4、兩基因的特異性引物對轉(zhuǎn)基因植株逐代進行PCR篩選，在T3代獲得1個編號為4的材料，PCR檢測其T4代8個株系4-1、4-2，4-3、4-4、4-5、4-6、4-7和4-8均表現(xiàn)為雙陽性。采用Southernblot和RT-PCR進一步分析，Southern分析表明目的基因RNaseL已經(jīng)整合進T4代水稻基因組中，RT-PCR分析表明轉(zhuǎn)入基因在T4代轉(zhuǎn)基因水稻中能正常轉(zhuǎn)錄，故認為目的基因已經(jīng)整合進T4代水稻基因組中，外源基因已經(jīng)穩(wěn)定遺傳到